第4章-2细胞化学染色检验(血液检验)课稿.ppt

掌握细胞化学染色临床应用 掌握各种细胞化学染色的原理及临床意义 熟悉各种细胞化学染色结果判断及正常血细胞染色反应 了解细胞化学染色的基本步骤 一、概念 细胞化学染色是细胞学和化学相结合 而形成的一门科学。它以细胞形态学为 基础，结合运用化学反应的原理对血细 胞内的各种化学物质(酶类/脂类/糖类/铁 /蛋白质/核酸等)作定性、定位、半定量 分析的方法。 二、必要性 从形态学观察，存在较多的主观性； 有些原始细胞形态较相似，难以鉴别； 结合细胞化学染色，提高疾病的诊断率。 三、临床应用 白血病的诊断：MICM分型 M：morphology I：immunology C：cytogenitics M：molecular biology 四、基本步骤 （1）物理法：干燥、火焰 （2）化学法： A、蒸气固定： B、液体固定：甲醛、乙醇、甲醇。 （1）偶氮偶联法：酯酶染色 （2）联苯胺法：POX （3）普鲁士蓝反应：Fe （4）雪夫反应：PAS （5）金属沉淀法：NAP （6）物理显色法：SBB 铁染色----中性红、伊红 PAS-------甲基绿 1. 细胞外铁： （ + ） ~（ ++ ） 2. 细胞内铁：铁粒幼红细胞阳性率大约 19~44%， I~II型（ I型为主），无Ⅲ 型、Ⅳ型、环形铁粒幼红细胞及铁粒 红细胞。 四、临床意义 1. 缺铁性贫血： 外铁（－），内铁10%； 治疗有效后，内外铁? 。 2. 铁粒幼细胞性贫血： 外铁?；内铁阳性率?，环形铁粒幼 红细胞增多，可见粗颗粒的Ⅲ、Ⅳ型 铁粒幼红细胞。 五、应用评价 铁染色是临床常用的一种细胞化学 染色，虽不如血浆铁蛋白敏感，但是反 映机体储存铁的金标准。 外铁：反映骨髓中铁的储存量； 内铁：反映骨髓中可利用的铁量。 二、正常血细胞染色反应 NAP主要存在于成熟的中性粒细胞胞质中。严重的化脓性感染时，晚幼阶段粒细胞也可见有阳性反应。 其他细胞基本呈阴性反应。 三、结果判断及参考范围 NAP染色结果报告包括阳性率和积分值。 阳性率：指计数100个中性成熟粒细胞，其阳性细胞的数量即为阳性率；积分值：指计数100个中性成熟粒细胞，不同阳性程度细胞数量乘以其阳性程度之和即为积分值，其计算公式为：积分值=(＋)数量×1 +(＋＋)数量×2 +(＋＋＋)数量×3 +(＋＋＋＋)数量×4。 四、临床意义 3. 疾病的鉴别： 五、应用评价 NAP染色有多种检测方法，国际标准化委员会推荐 Kaplow萘酚AS-BI磷酸钠法和Tomonaga萘酚AS-MX 磷酸钠法。钙-钴法试剂成本低廉，操作繁琐，反应 时间长，临床上逐步被偶氮偶联法取代，阳性产物色 泽鲜明、定位精确，尤其以萘酚AS-BI磷酸钠法最为 广泛使用，利于评定NAP活性强度的分级。常用重氮 盐有坚牢蓝RR、坚牢蓝BB、坚牢紫酱等，不同偶联 有不同的灵敏度。 过氧化物酶染色 (peroxidase，POX) 一、原 理 粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有过氧化物酶(POX)，它可分解H2O2释放出新生态的氧，后者氧化二氨基联苯胺，形成金黄色不溶性沉淀，定位于胞质内酶活性部位。 三、正常血细胞的染色反应 1. 粒细胞系统： 原始粒细胞（－）或（+） 早幼粒以下细胞均（+），阳性逐渐增强。 中性分叶核粒细胞：强阳性 嗜酸粒细胞：阳性最强 嗜碱粒细胞：（－） 四、临床意义 主要用于鉴别急性白血病的类型 （1）急淋和急性髓细胞系的鉴别： 急淋：（－），阳性率3%； 急单：弱阳性； 急粒：阳性（ + ～ + + + ）。 （2）鉴别诊断： a. 小原粒（+）与原淋（－） b. 急性早幼粒白血病(+++)与急单（+） c. 急单（+）与组织细胞白血病、 恶性组织细胞病（－） 一、原理 苏丹黑B是一种脂溶性重氮染料，可溶解细胞内含脂结构(中性脂肪、磷脂、糖脂和类固醇)，而使脂类物质显示出来，呈棕黑色或深黑色(粒细胞：丰富；单核细胞：少量)。 二、SBB与POX区别： 1. 粒细胞系统：（阳性逐渐增强） 原始粒C（－）或（+）