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临 床 细 菌 检 验 常用的几种试验 菏泽市立医院 革 兰 氏 染 色 快速染色法： 1、初染：结晶紫染色10秒，水洗，甩干； 2、媒染：革兰氏碘液染色10秒，水洗，甩干； 3、脱色：95%酒精脱色10~20秒，水洗，甩干； 4、复染：沙黄或复红染色10秒，水洗，干后镜检。 5、结果判定：G +呈紫色，G-菌呈红色 G+菌 G-菌 氢氧化钾拉丝试验 “氢氧化钾拉丝试验”快速鉴定革兰氏阳性菌1、原理：由于革兰阴性细菌的细胞壁肽聚糖层数少于稀碱溶液内易于破裂，而释放出未断裂的DNA螺旋，使KOH菌悬液呈现粘性，可有搅拌后拉出丝来，而革兰阳性菌在稀碱溶液中仍保持不变。2、试剂：4%KOH水溶液。应新鲜配制。3、方法：取1滴4%KOH水溶液于洁净玻片上，用接种环于固体培养基上取新鲜配制菌落少许，于KOH溶液中搅拌混匀，并每隔几秒钟上提接种环，观察能否拉出丝来。4、结果：能用接种环拉出丝来为阳性，仍为混悬液则为阴性。大多数革兰阴性菌于5到10秒内出现阳性，有的需30到45秒。革兰阳性菌于60秒以后仍阴性。 抗 酸 染 色 1、初染：石炭酸复红加热染色3-5分钟，水 洗，甩干； 2、脱色：3%盐酸酒精脱色30~60秒，水 洗，甩干； 3、复染：碱性美兰60秒，水洗，干后镜检。 4、结果判定：抗酸菌呈红色 ，非抗酸菌呈兰色 5、意义：用于鉴别抗酸菌与非抗酸菌 抗酸染色---抗酸菌　 氧化酶试验 原理：具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化型细胞色素C使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物。 方法：取一洁净的滤纸一小块，涂抹菌苔少许，加一滴氧化酶试剂（对苯二胺溶液）于菌上，观察颜色变化。 判断：立即呈粉红色并迅速转变为紫红色为阳性，不变色为阴性。 意义：肠杆菌科细菌与气单胞、假单胞菌的鉴别 触酶试验 1.原理：具有触酶（过氧化氢酶）的细菌，能催化过氧化氢，放出新生态氧，继而形成分子氧，出现气泡。 2.方法：用接种环挑取固体培养基上的菌落置于洁净的玻片上，然后滴加3%过氧化氢溶液一滴，观察结果。 3.结果判断：在5秒内释放大量的气泡为阳性。 4.意义：大多数球菌触酶试验阳性，但链球菌为阴性，主要用于鉴别葡萄球菌与链球菌。 血浆凝固酶试验 1.原理：金黄色葡萄球菌可产生两种凝固酶。一种是结合凝固酶，结合在细胞壁上，使血浆中纤维蛋白原变成纤维蛋白附着于细菌表面上，发生凝集，用玻片法测出。另一种是菌体生成后释放与培养基中的游离凝固酶，能使凝固酶原变成凝血酶类物质，从而使血浆凝固，可用试管法测出。 2.方法： （1）玻片法：取血浆和生理盐水各一滴分别滴到清洁玻片上，挑去待检菌落分别与血浆及盐水混合，如血浆中出现明显凝集颗粒而盐水中无自凝现象者为阳性。 （2）试管法：取试管两支，分别加入0.5ml的血浆（经生理盐水1：4稀释）挑去菌落数个加入测定管充分研磨混匀，用一只阳性菌株加入对照管，37℃3-4小时。血浆凝固者为阳性。 奥普妥辛实验（OP试验） 1.原理：肺炎链球菌对Optochin（乙基氢化去甲奎宁）十分敏感，作用机理是干扰肺炎链球菌叶酸的合成，可抑制其生长，其他链球菌如草绿色链球菌对其不敏感。借此可对肺炎链球菌与草绿色链球菌加以鉴别。 2.方法：将待检的a溶血的链球菌均匀的涂布于血平板上，贴放Optochin纸片（含药5mg)35℃孵育18-24小时，观察抑菌圈的大小。 3.结果判断：抑菌圈〉14mm为肺炎链球菌，无或见很窄的抑菌圈为草绿色链球菌。 卫星试验 1.原理：流感嗜血杆菌生长时需要X、V两种因子，在血平板上形成极小、圆形透明的菌落，若与金葡菌同时培养，由于金葡菌产生V因子，促进流感嗜血杆菌的生长，在金葡菌周围的细菌菌落较大，形成卫星生长现象。在普通培养基上不生长。 2.方法：用取菌环挑去可疑菌落分别接种在血平板、MH平板上，再用取菌针挑取金葡菌与原划线垂直划一直线接种在平板上。35℃24小时观察结果。 3.结果判断：金葡菌周围的细菌菌落较大，卫星试验阳性 4.意义：仅血平板上出现卫星现象--流感嗜血杆菌； 血平板与MH均呈卫星现象--副流感嗜血杆菌。 借此用于鉴别流感与副流感嗜血杆菌。 CAMP试验 1.原理：B群链球菌在血平板上能产生CAMP因子，可促使金黄色葡萄球菌β 溶血素的活性，故在血平板上两种细菌交界处溶血能力增强，形成箭头状透明状溶血区。其他链球菌一般不产生CAMP因子，故此试验可作为B群链球菌的鉴定指标之一。 2.方法：在血平板上，用金黄色葡萄球菌划一条横线，再于该直线相距5mm