蛋白激酶A（PAK）介导的信号通路.ppt

蛋白激酶A（PAK）介导的信号通路 报告人：陈亮 关键内容 蛋白激酶A是由2个调节亚基与2个催化亚基构成的异四聚体. 在不同的组织中， PKA可以起着不同的调节作用，如生长、分化和特定基因的表达. 在免疫系统中，PKA介导了一个普遍性的抑制性信号，对维持免疫系统的稳定起着重要的作用. PKA 通过对Raf-1的磷酸化抑制了Raf-1的激活，从而阻断了Ras/Raf-1/MEK/MAPK信号通路的激活，抑制细胞的增殖. 在转录因子的调节方面，PKA可以激活CREB而促进了含CRE基因的转录； 但它同时却抑制了NF-kB的活性而介导了细胞因子等表达的抑制 40多年前，Sutherland和Rall发现了cAMP以及它作为细胞内“第二信使”的功能. 此后在糖原分解的研究中人们发现了蛋白激酶A，它可以被cAMP激活，并能通过Ser残基的磷酸化而激活磷酸化酶激酶， 该激酶再使糖原磷酸化酶由无活性的磷酸化酶b型转化为a型［１］，从而催化糖原的分解. 随着克隆技术的快速发展，新发现的蛋白激酶及其同工酶以几何级数的速度增长着，对它们的研究也日趋深入. 其中，蛋白激酶A是最小、最简单，也是研究最为透彻的蛋白激酶之一. 蛋白激酶A的分子结构 蛋白激酶A ，又名cAMP依赖的蛋白激酶, 当cAMP不存在时， PKA以无活性的全酶(holoenzyme)状态存在. PKA的分子是由2个调节亚基和2个C*催化亚基构成的异四聚体，当PKA的调节亚基与cAMP结合时， 导致了调节亚基的结构变化而与催化亚基解离产生1个催化亚基二聚体和2个激活的催化亚基单体［２］. 其解离反应式可以表示如下：R2C2+4cAMP R2(cAMP)4+2C*(指活化态，对(ⅰ) 蛋白激酶A的催化亚基. 蛋白激酶A为一类丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，它的催化亚基可以使特异底物肽段的Ser或Thr残基磷酸化. 在哺乳动物中，依据氨基酸顺序的不同，催化亚基主要分为两类同工酶：Cα和Cβ，它们催化的底物具有如下共有序列: X-Arg-Arg-X-Ser-X (X代表任何1个中性氨基酸，Arg在激酶的底物识别中有着重要的作用). PKA的催化亚基含有3个结合部位：Mg-ATP结合部位，催化部位以及底物肽结合部位. Mg-ATP结合部位包括催化亚基氨基端的富甘氨酸环(glycine-rich loops) 以及Lys72. Lys72位于激酶的催化核心，它的突变导致了蛋白激酶的失活. 它在任何一个蛋白激酶中都是保守不变的激酶的催化活性是必须的 。 羧酸基团在催化过程中起着重要的作用. 其中，Asp184和Glu91的去质子化状态起着广义碱的作用，催化底物中Ser/Thr残基的羟基质子解离；另外一些酸性氨基酸残基，如Glu170，Asp328，Glu332等的羟基则可与底物肽保守序列中的碱性氨基酸——精氨酸的胍基相结合，起到识别底物的作用. 亲和性标记分析说明，底物肽的识别部位是相当分散的，除了上述部位外，还包括Cys199，Thr197， Glu125, Met127等残基. 圆二色性分析表明，底物的结合诱导了激酶构象的改变，在二级结构上产生了α-螺旋结构的减少(49%→31%)并同步发生β-折叠结构的增加(20%→49%). 同时，Mg-ATP与催化亚基的结合也增强了激酶与底物肽的结合. (ⅱ) 蛋白激酶A的调节亚基. 调节亚基通过与催化亚基解离与结合以调节其活性. 依据其氨基酸顺序的差异，调节亚基可以分为类型Ⅰ(RⅠ)和类型Ⅱ(RⅡ). 在功能上，两者也存在着差异：RⅡ含有1个磷酸化的部位；RⅠ不含磷酸化部位， 但含有一个高亲和性的Mg-ATP结合部位，它们都位于调节亚基的激酶抑制部位中. 根据调节亚基的差异，PKA分为2个亚类：PKAⅠ与PKAⅡ. 每个调节亚基都含有2个高亲和性的cAMP结合部位：A和B，位于肽段的羧基端. 这2个cAMP结合部位都与蛋白激酶A全酶的解聚以及激活有关，而且cAMP的结合与全酶的激活呈强的正协同效应. 首先，cAMP与B部位的结合改变了调节亚基的构象，从而使A部位更易于结合cAMP. A部位与cAMP的结合则令调节亚基的绞链区包括激酶抑制区域同催化亚基解离，从而释放出2个活化的催化亚基. 活化的PKA催化亚基可以通过胞内的转位而接近不同的底物蛋白. 在胞浆中，PKA可以通过调节Raf-1/MAPK 的活性而传递信号入核；催化亚基还可以直接转位进入核内，调节一些转录因子的活性，如CREB家族. PKA通过对底物蛋白激酶或转录因子的磷酸化反应，调节基因的转录或翻译，从而介导细胞对外界刺激的反应. 腺苷酸环化酶的激活和cAMP的产生 G蛋白和腺苷酸环化酶(ACase)的活化 腺苷酸环化酶的磷酸化抑制与脱敏 cAMP在胞内水平的调节 胞外配基(