病原生物学实验课4-肠道病原菌的分离与鉴定3.ppt.pptVIP

肠道病原菌的分离与鉴定三 肠道病原菌的分离鉴定（3） 细菌的药敏实验结果观察 厌氧菌培养法及厌氧菌生长状态 小白鼠感染肺炎球菌实验结果观察 细菌致病性试验 双糖铁培养基的制备 成分：脲 胨、乳 糖、蛋白胨、葡萄糖、硫酸亚铁、氯化钠、硫代硫酸钠、琼脂、蒸馏水、酚红水溶液 制法：加热溶解校正pH为7.2，然后加入0.4％酚红水溶液，分装试管，高压灭菌，使成为底层较深的斜面。 用途：初步鉴别肠道致病菌用，可以观察葡萄糖、乳糖的发酵，并可观察有无H2S产生及细菌有无动力。 原理 该培养基中只加少量的葡萄糖与较多量的乳糖。细菌分解糖类产酸可使培养基局部指示剂改变颜色。当分解葡萄糖的细菌在斜面上生长时，产生的酸少，又在有O2的情况下氧化，生成CO2和H2O，失去改变局部酸碱度的作用，所以培养基斜面部分不变色。但当细菌分解乳糖时产生酸量较多，故培养基斜面部分可变色。细菌在高层中生长时，因处于无O2状态，产生的酸不分解，故使高层部分培养基指示剂变色。硫酸亚铁可与产生的H2S作用，生成FeS使培养基变黑。硫代硫酸钠是一种还原剂，防止培养基中氧化物与H2S作用而影响FeS的生成。 生化反应结果观察 血清学鉴定 主要沙门氏菌抗原结构表 厌氧培养法 材料：厌氧罐、厌氧气袋、钢丝绒、厌氧手套箱、干燥皿、焦性没食子酸等。 方法：厌氧菌的培养方法种类较多，总体上可以分为三大类：物理法、化学法和生物耗氧法。 1、物理法：厌氧罐培养法、厌氧气袋法 、钢丝绒法 、厌氧手套箱法 2、化学法：平皿焦性没食子酸法 3、生物耗氧法 * * + - ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ +++ - - - ⊕ ⊕ - ⊕ 肠炎杆菌 + - +/- + - +/- +/- - - - + + - + 伤寒杆菌 + - ⊕ - ⊕ - +/- - - - ⊕ ⊕ - ⊕ 猪霍乱杆菌 + - ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ + - - - ⊕ ⊕ - ⊕ 丙型付伤寒杆菌 + +/- ⊕/- ⊕/- ⊕/- ⊕ +++ - - - ⊕ ⊕ - ⊕ 鼠伤寒杆菌 + +/- ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ +++ - - - ⊕ ⊕ - ⊕ 乙型付伤寒杆菌 + - - ⊕ ⊕ ⊕ +/- - - - ⊕ ⊕ - ⊕ 甲型付伤寒杆菌 动 力 肌 醇 木 胶 糖 蕈 糖 鼠 李 糖 阿拉伯胶糖 硫 化 氢 尿 素 靛 基 质 蔗 糖 甘 露 醇 麦 芽 糖 乳 糖 葡 萄 糖 菌 名 （1）沙门氏菌属 取一载玻片与沙门氏菌属、群、型血清做玻片凝集试验。 ①取可疑培养物，先与A--E群沙门氏菌多价O血清做凝集试验，阳性者认为该菌属于沙门氏菌属。 ②用沙门氏菌属各群特有的单价O因子血清做凝集反应，可判定其属于沙门氏菌属何群。 ③用该群内各菌所特有的H因子血清作玻片凝集反应，可最后判定为何种菌。 1.6 e.h 3. 10. 鸭沙门氏菌 E -- g.m 1. 9. 12 肠炎杆菌 -- d 9. 12. Vi 伤寒杆菌 D 1.5 c 6. 7 猪霍乱杆菌 1.5 c 6. 7. Vi 丙型副伤寒菌 C 1.2 i 1. 4. 5. 12. 鼠伤寒杆菌 1.2 b 1. 4. 5. 12. 乙型副伤寒菌 B 1.2 a 1. 2 12. 甲型副伤寒菌 A 第二相 第一相 H抗原 O抗原 菌 名 群