第七章抗原抗体反应第七章抗抗体反应原抗体反应.ppt

ppt课件制作及讲课 原则 自愿 有兴趣 组织方式 分组讲 选出最好在班上讲 内容 自选 数量 15张 分别折算 1 2 3次作业 上章小结： 一﹑基本概念 主要组织相容性复合物等 二﹑MHC抗原的结构和功能 MHC-I MHC-II结构、功能及两者与肽结合的区别 三﹑MHC抗原基因多态性及结构 四﹑MHC的检测原理和应用 二﹑单克隆抗体的制备 问题：血清中的抗体是由多个抗原决定簇刺激B细胞克隆而产生的抗体，是多克隆抗体(PAb)，通过分离的方法不可能获得真正的单一抗体。 如何获得大量的一种抗体？ 由单一B细胞克隆而产生的抗体，称单克隆抗体(MAb)。 1 、制备MAb(monoclonal Ab,mAb)的原理 利用B细胞能分泌抗体而肿瘤细胞能在体外长期培养并可低温保存的优点，通过细胞杂交，融合二类细胞，从而筛选得到既有抗体分泌性又有不断分裂性的杂交瘤细胞，将其细胞单克隆化。 用单克隆化的杂交瘤细胞进行单克隆抗体的生产，称为杂交瘤技术。 该技术是1975年由G.K?hler Milstein创立的。 用于制备B细胞的小鼠常用Balb/c品系，为H-2d单元(倍)型。 B细胞从小鼠的脾脏制取。 为保证B细胞有旺盛的分泌抗体活性，分离前3天一次静脉加强免疫。B细胞要悬浮于没有血清的培养液。 ? 骨髓瘤细胞有多种细胞株，营养缺陷型是一种。 缺陷是细胞缺少次黄嘌呤、鸟嘌呤核苷酸转移酶(HGPRT)和胸腺嘧啶激酶(TK)，另一条核酸合成必须酶。当合成核酸的正常途径被阻断后（培养基中加入氨基喋呤），虽然培养基中有这二种底物(次黄嘌呤、胸腺嘧啶) ，但缺陷细胞仍不能合成核酸而死亡。 如果骨髓瘤细胞与B细胞发生了融合，因B细胞有正常的2套核酸合成酶系，正常途径受阻后，能利用培养基中的次黄嘌呤(H)、胸腺嘧啶(T)来合成核酸，因此融合后的杂交瘤细胞能在选择培养基中正常分裂生长。 骨髓瘤细胞还应该具有不能合成抗体或合成了也不能分泌的特性 融合时，骨髓瘤细胞应处于对数生长期，B细胞有旺盛的分泌抗体活性。 融合细胞按B细胞：骨髓瘤细胞＝5—10：1，总细胞数在107--108水平。 加入融合剂：50%的聚乙二醇(PEG)，37℃下融合1—2min。 然后用培养液RMPI1640进行洗涤稀释，去除PEG后，于HAT培养基上培养. 筛选抗体分泌株：是将对HAT上形成的杂交瘤细胞集落进行抗体活性检测。 单克隆化：将多种细胞混合生长的细胞团分离为单克隆， HAT:即含有次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶(T)的选择培养基，简称HAT。 这种培养基能使杂交瘤细胞生长，而营养缺陷型的骨髓瘤细胞不能生长，B细胞因本身在培养基中不能生存。这样就能容易地将已经发生了融合的杂交瘤细胞筛选出来，其它细胞自然被淘汰。 三 抗体工程 四 催化性抗体 五 抗体在抗肿瘤治疗中的应用 二节﹑抗原抗体反应 一、抗原抗体反应的特点 ★抗原与抗体的特异性结合,既可以发生在体内,也可发生在体外。 发生在体外是许多免疫检测方法的基础。 ★抗原与抗体相互作用是非共价的、可逆的,其特性符合许多化学反应的基本原理. 特异性 抗原与抗体相互结合没有共价键形成，只能通过次级键相互作用，在极短的距离内才有效，因此抗原决定簇和抗体结合位点在空间上必须处于紧密接触的状态，才能产生足够的结合力(亲和力)。 这种分子间的互补结构决定了抗原抗体结合的专一性。 抗原抗体结合的可逆性 二 抗体与单价抗原的作用 三 抗体与大分子多价抗原反应 ①大分子多价抗原 具有多个抗原决定簇，能与多个抗体结合的大分子物质。 ②抗原抗体的亲和力和亲合力 单价抗原与抗体的结合力，称亲和力。 多价抗原与抗体的总结合强度，称亲合力。 亲合力大大强于每一位点的亲和力，其强度的增加不仅仅是亲和力的简单相加，是呈几何级数上升的。 ③抗原抗体反应的表现——形成沉淀 与抗原抗体比例密切相关，一定浓度的抗体与一定浓度的抗原才能形成沉淀. 抗原或抗体过剩都不能形成沉淀或很少。 ④交叉反应 有几个决定簇的两个抗原，如果其中有一个决定簇相同，那么免疫获得的抗体中就有能与两种抗原上相同决定簇都能结合的一种抗体，即有交叉反应现象。如M抗原和N抗原 三﹑抗原抗体反