5.1DNA粗提取与鉴定.ppt

观察你提取的DNA颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多；二苯胺鉴定出现蓝色说明实验基本成功，如果不呈现蓝色，可能所提取的DNA含量低，或是实验操作中出现错误，需要重新制备. 四、课题成果评价 （一）是否提取出了DNA 　　本实验提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质. （二）分析DNA中的杂质 （三）不同实验方法的比较 　　对于不同的实验方法，本课题可以采用分组的方法进行研究。首先选取不同的实验材料，其次同种材料还可以采用不同方法，从多方面比较实验结果，如DNA的纯度、DNA的颜色、二苯胺显色的深浅等，看看哪种实验材料、哪种提取方法的效果更好． 五、课堂小结 １、提取ＤＮＡ分子的基本思路 ２、提取ＤＮＡ分子的基本原理 ３、ＤＮＡ分子的鉴定方法 ４、实验设计与分析 1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是( )。 A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出 C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA 六、课堂实效演练 B 2、在向溶解DNA的NaCl溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（ ） A 加快DNA溶解的速度 B 加快溶解杂质的速度 C 减小DNA的溶解度，加快DNA析出 D减小杂质的溶解度，加快杂质的析出 C 3、与析出DNA粘稠物有关的叙述，不正确的是 A 操作时缓慢滴加蒸馏水，降低DNA的溶解度 B 操作时用玻棒轻缓搅拌以保证DNA分子的完整 C 加蒸馏水可以同时降低DNA和蛋白质的溶解度 D 当丝状粘稠物不再增加时，NaCl溶液的浓度可以认为是0.14mol/L 4、向溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液中不断加入蒸馏水,在这个过程中DNA的溶解度变化情况分别是 A 减小;减小 B 增大;增大 C 先减小后增大 D增大; 减小 5、欲使溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液中的DNA析出，最有效的办法是 A 加蒸馏水 B 加矿泉水 C 加清水 D 加生理盐水 * 课题1 DNA的粗提取与鉴定 专题五 DNA和蛋白质技术 一、基础知识 （一）提取DNA的方法 1.提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法，分离具有不同物理或化学性质的生物大分子 2.提取DNA的基本思路 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分 （二）提取DNA分子的基本原理 原理１:利用ＤＮＡ分子的溶解性 原理２:利用ＤＮＡ分子的耐受性 1、DNA的溶解性 当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0．14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出 如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ （1）DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反 　　（2）DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的蛋白质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离。 ２、DNA分子的耐受性 ① 蛋白酶——水解蛋白质， 对DNA没有影响 ② 高 温——大多数蛋白质不能忍受60～80℃的高温， 而DNA在80℃以上才会变性 ③ 洗涤剂——溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质 但对DNA没有影响 ③ DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂 ②紫外灯照射法 A、配制染色剂，用蒸馏水配制万分之五的溴化已锭（EB） B、将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上，再滴一滴EB溶液染色 C、将蜡纸放在紫外灯(260 nm)下照射（暗室 中），可见橙红色的荧光(DNA的紫外吸收高峰在260 nm处) ①甲基绿 （蓝绿色） （三）DNA分子的鉴定 二、实验设计 （一）实验材料的选取 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 （三）去除滤液中的杂质 （四）DNA的析出与鉴定 （一）实验材料的选取 　　　　　　　鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。 （从中选取2～3种实验材料） 　　　　　　　凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的，以及提取比较容易的生物组织，成功的可能性更大。 １、原则： ２、材料： 从核DNA数目来看，猪38条