流式细胞仪测试服务用户须知.doc

流式细胞仪测试服务用户须知 本测试中心流式细胞仪可提供服务内容： 细胞周期测定：利用PI/RNAse或者 BrdU Flow kit等对细胞周期进行测定的研究者提供测定服务和数据分析。 细胞凋亡测定：利用AnnexinV/PE apoptosis kit等对细胞凋亡进行测定的研究者提供测定服务和数据分析。 细胞标记荧光检测: 对于导入细胞的荧光标记物，荧光代谢物及细胞表面抗原进行测定的研究者提供测定服务和数据分析。 二、收费标准：注：不提供测试试剂，只负责流式细胞仪测定所需的鞘液。 服务要求： 用户详细阅读本中心网站（）开放服务相关内容了解测试用户须知、设备性能指标。 四、测试样品要求： 细胞悬浮液：5 x 105 cells/FACS tube 2. 具体实验步骤可参见提供的细胞调整方法（FACS PI protocol） 附件I 流式细胞仪样品登记表 日期 样品来源 样品名称 数量 病毒携带否 使用者 FACSCalibur protocol 目的：流式细胞仪开机程序、预设获取模式文件、设定和调整、样品分析、关机程序一．开机程序1．检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。2．打开储液箱，倒掉废液, 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFlow），合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。3．将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY，预热5－10分钟。排出过滤器内的气泡。4．如果需要打印，打开打印机电源。5．打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。6．执行仪器PRIME功能一次，以排除Flow cell中的气泡。7．分析样品时，先用FACAFlow 或PBS进行HIGH RUN约2分钟。二．预设获取模式文件(Acquisition Template Files)1．从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。2．选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot，绘出一个或多个Dot Plots（点图）。从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源，并确定适当的x轴和y轴参数。3．选取屏幕左列绘图工具中的Histogram，同上法可绘出Histogram（直方图）。4．将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest Folder \EXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP，储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \EXP文件夹中，ACQ用于细胞DNA检测，EXP用于细胞表面标志分析。三．用CELLQuest进行仪器的设定和调整1．从苹果画面中选取CELLQuest，进入CELLQuest后在File指令栏中打开合适的获取模式文件。2．从屏幕上方Acquire指令栏中，选取Connect to Cytometer进行电脑和仪器的连机。将出现的Acquisiton Control对话框移至合适位置。3．从Cytometer指令栏中，开启Detectors/Amps、Threshold、Compensation、Status等四个对话框，并将它们移至屏幕右方，以便获取数据时随时调整获取条件。也可以用 +1，2，3，4获得此四个对话框。4．在Detectors/Amps对话框中，先为每个参数选择适当的倍增模式(amplifier mode)：线性模式Lin或对数模式Log。一般进行细胞表面抗原分析如分析外周血的淋巴细胞亚群时，FSC和SSC多以线性模式Lin测量，且DDM Param选择FL2，而FL1, FL2与FL3则以对数模式Log测量；分析细胞DNA含量时，FSC，SSC，FL1，FL2，FL3皆以Lin进行测量，且DDM Param选择FL2；分析血小板表型时，FSC，SSC，FL1，FL2，FL3等均以Log进行测量。5．放上待检测的样品，将流式细胞仪设定于RUN，流速可在HIGH 或LOW上。6．在Acquisiton (Control对话框中，选取Acquire，开始获取细胞。在以下的仪器调整过程中随时选取Pause，Restart以观察调整效果未完全调整好之前不要去掉SETUP前7．在Detectors/Amps对