H9亚型禽流感病毒免疫磁珠分离方法初步建立.docVIP

H9亚型禽流感病毒免疫磁珠分离方法初步建立 　　摘要：禽流感病毒（AIV）严重危害世界养禽业，是举世瞩目的重大人畜共患病原，环境中微量病原是潜在的重要传染源，很难进行监测。为了提高畜禽环境中微量病原的监测效率，样品的必要预处理非常重要。制备了粒径约30～100 nm的Fe3O4纳米粒子，并利用戊二醛二步法偶联H9-HA单抗和磁珠，偶联效率约为130 mg/g；200 μL免疫磁珠（5.6 mg/mL）可分离纯化100 μL血凝价为28的AIV-H9。制备的免疫磁珠可以为纯化和富集畜禽生活环境中的微量病原提供便利，结合其他病原检测手段将有助于提高环境中病原的监测效率。 　　关键词：H9亚型禽流感病毒；Fe3O4；免疫磁珠 　　中图分类号：S852.65 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）10-2603-04 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.10.038 　　Abstract： Avian influenza virus（AIV） was one of the major zoonotic pathogens which seriously harmful to the world poultry industry. AIV is excreted in the environment by AIV-infected birds and the trace pathogens were the potentially important source of infection but difficult to be monitored. In order to effectively monitoring the pathogens in poultry environment， the pretreatment for samples was very important. In this study， Fe3O4 nanoparticles with particle size about 30-100 nm were prepared， and the coupled with H9-HA monoclonal antibody and beads. The coupling efficiency was about 130 mg/g. The results showed that 200 μL immunomagnetic beads（IMB） at concentration about 5.6 mg/mL could isolate and purify 100 μL of AIV-H9 with hemagglutination titer for 28. It indicated that IMB could provide convenience to purify and enrich trace pathogens in of animal living environment， which will improve the efficiency of monitoring pathogens in the environment cooperating with other method. 　　Key words： H9N2 subtype AIV； Fe3O4； Immunomagnetic beads 　　禽流感病毒（AIV）严重危害世界养禽业，是举世瞩目的重大人畜共患病原，近年来发生了数起不同血清亚型禽流感病毒感染人事件，为人类积极预防和控制禽流感的流行敲响了警钟[1-4]。AIV主要通过感染禽的呼吸道、黏膜分泌物和粪便不断排出，人和其他动物通过密切接触病禽及其分泌物、排泄物和污染的环境而被感染[5]。自然界中，鸟和水禽的粪便以及养禽场的废弃物和污水是潜在的主要传染源，因此加强畜禽内外生活环境中AIV检测，及时预警，更有助于AIV防控。但环境中组分复杂，一般情况AIV含量少，现有的AIV检测方法，包括传统的实验室诊断方法（病毒分离和血清学方法）和分子生物学检测技术很难适应畜禽生活内外环境中微量AIV的监测，直接检测效率低下。因此，需通过有效分离纯化技术分离纯化或富集过程以提高检测成功率。 　　免疫磁性微球（Immunomagnetic microspheres，IMMS），或称免疫磁珠（Immunomagnetic beads， IMB），是免疫微球的一种，是表面结合有抗体的磁性微球。它兼具免疫反应的特异性及磁性分离的快速性。在磁力作用下，固液相的分离十分简单，特异性抗原与其他物质可以迅速分离，省去离心、