一种烟草细菌性病害病原菌分离培养及致病性测定.docVIP

一种烟草细菌性病害病原菌分离培养及致病性测定 　　摘要：从贵州六盘水烟区采集感病烟株，采用组织分离法进行病原菌分离纯化，并将培养条件进行优化，以南江3号烟草品种为试材，进行病原菌致病性测定。结果表明，该菌培养最适NaCl浓度4%，葡萄糖浓度10%，pH值5～7，培养温度25～30℃，最佳侵染温度20～25℃，相对湿度70%以上，该病害应属于中温高湿侵染病害。 　　关键词：烟草；病原菌；分离培养；致病性 　　中图分类号：S435.72 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2016）11-0072-04 　　Abstract The isolation and purification of pathogen of a tobacco bacterial disease was conducted from tobacco-growing areas in Liupanshui of Guizhou Province using the issue separation method. Its culture conditions were optimized， and the pathogenicity was measured with Jiangnan 3 as material. The results showed that the optimum growth conditions of this pathogen were 4% of salt concentration， 10% of sugar concentration， 5 to 7 of pH value， and 25～30℃ of cultivation temperature. And the best infesting conditions of this pathogen were 20～25℃ of infesting temperature， and more than 70% of relative humidity. Thus， the disease was easy to infection under middle temperature and high humidity conditions. 　　Keywords Tobacco； Pathogen； Isolation and culture； Pathogenicity 　　烟草作为我国重要的经济作物，其产业的良好发展得到广泛关注[1]。而烟草细菌性病害是威胁烟草生产的主要病害之一，其发生普遍且危害严重，严重影响着烟草的质量和产量，进而导致经济效益极大受损。已经报道的细菌性病害有青枯病、细菌性角斑病、野火病、空茎病、细菌性黑杆病等[2-8]。余磊等于2004年报道了云南文山州西畴县和保山市昌宁县发现1种由细菌铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）侵染引起的烟草新病害[1]。2007年，笔者在贵州省盘县烟区忠义、保田发现一种烟草未知病害，该病害在忠义乡开始零星发生，主要为害烟株中下部叶片叶柄，造成叶片呈水浸状腐烂，发病严重时，烟株中下部茎秆与叶柄连接处开始出现水浸状斑点，最后呈溃疡状腐烂，2009年发生面积达60多公顷，重病田块病株率达100%，严重田块造成绝收，2010年发生面积增大，有逐渐蔓延趋势，严重制约着该地区烤烟生产。本试验对该病的病原菌进行培养条件优化及致病性测定，以明确其生物学特性，为病害防治提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 供试烟草品种 从盘县忠义发病烟田采回发病烟叶及茎秆（品种：南江3号），室内接种鉴定品种南江3号。 　　1.1.2 主要试剂 牛肉膏 （北京奥博星生物科技有限责任公司）； 蛋白胨 （北京双旋微生物培养基制品厂）；琼脂 （福建莆田市联邦琼脂有限公司）； NaCl （重庆川江化学试剂厂）。 　　1.1.3 培养基配方 NA培养基：牛肉膏3.0 g，NaCl 5.0 g，蛋白胨 10.0 g，琼脂 20.0 g，pH 6.8～7.0，加水定容到1 000 mL，121℃湿热灭菌20 min。 　　JNFb培养基：DL-苹果酸5 g?L-1、K2HPO4 0.6 g?L-1，KH2PO4 1.8 g?L-1，MgSO4?7H2O 0.2 g?L-1，NaCl 0.1 g?L-1，CaCl2?H2O 0.2 g?L-1，FeEDTA 0.066 g?L-1，溴香酚蓝指示剂2 mL，微量元素2 mL，KOH 4.5 g?L-1，pH 5.8，固体培养基加入琼脂17 g。微量元素成分如下：Na2MoO4?2H2O 0.2 g，MnSO4?H2O 0.235