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临床检验讲义 第一章 血液标本采集和血涂片制备 1．血液标本采集和抗凝剂 血液在循环系统中不断地流动，与全身各系统的组织器官均有密切的联系，参与机体的功能活动，维持正常的新陈代谢和内外环境的平衡。在病理情况下血液中各成分质和量的改变不仅能反映造血系统的疾患，而且能直接或间接地提示全身或局部组织器官的病变。很多因素会影响到血液标本检测，如患者的活动情况和精神状态、药物、年龄、性别、种族、标本采集的时间以及是否吸烟等都会明显影响检测结果。此外，血液标本的分析应密切结合临床，例如，患者有严重腹泻或呕吐时，红细胞计数可因脱水而增高。 （1）采血方法：血标本的正确采集是获得准确、可靠的实验结果的关键。血液标本的采集分为皮肤采血法、静脉采血法和动脉采血法，所有的采血技术均要求保持血液标本的完整性。不同的采血法无论细胞成分或化学组成，多存在不同程度的差异，因此在判断和比较结果时必须予以考虑。 1）静脉采血法：当所需血量较多或采用全自动血液分析仪测定时，通常使用静脉采血法。位于体表的浅静脉几乎均可作为采血部位，通常采用肘部静脉；如肘部静脉不明显时，可改用手背静脉或内踝静脉，必要时也可从股静脉采血。 2）皮肤采血法：此法所采之血实质是微动脉、微静脉和毛细血管的混合血，也含有细胞间质和细胞内液。主要用于各种微量检查或一般常规检查，多选择手指为采血部位。世界卫生组织（WHO）推荐取左手无名指指端内侧血液做血液一般检验。婴幼儿手指太小可用脚拇趾或足跟采血。严重烧伤患者，应选择皮肤完整处采血。为避免交叉感染，应严格实行一人一针制，有利于采血的质量控制。皮肤采血的主要缺点是易于溶血、凝血和可能混入组织液，检查结果重复性差。 3）真空采血法：又称为负压采血法。各种真空定量贮存抗凝试管，根据需要标有不同的色码备用，适于不同的检验项目。该法采用封闭式采血，血样无需容器之间的转移，减少了溶血现象,能有效保护血有形成分保证待验血原始性状完使检验结果更近真实,为临床诊断提供可靠依据。。 1）乙二胺四乙酸（EDTA ）盐：常用其钠盐或钾盐，能与血液中钙离子结合成螯合物，而使Ca2+失去凝血作用，从而阻止血液凝固。EDTA盐对血细胞形态和血小板计数影响很小，适用于多项血液学检查。但EDTA影响血小板聚集，不适合于作凝血象检查和血小板功能试验。 2）草酸盐：常用的有草酸钠、草酸钾和草酸铵，它们溶解后解离的草酸根与标本中的钙离子形成草酸钙沉淀，使Ca2+失去凝血功能。草酸钠通常用0.1mol/L浓度，与血液按1：9比例使用，过去主要用于凝血象检查。但草酸盐对凝血V因子保护功能差，影响凝血酶原时间测定效果；草酸盐与钙结合形成的沉淀物，影响自动凝血仪的使用。因此，凝血象检查宜选用枸橼酸钠为抗凝剂。H值的影响：细胞各种成分均属蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定，在偏酸性环境中下正电荷增多，易与伊红结合，染色偏红；在偏碱性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。 2）姬姆萨染色法：姬姆萨染液由天青、伊红组成。姬姆萨染色原理和结果与瑞氏染色基本相同，但对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示更清晰，而胞质和中性颗粒则染色较差。 第二章 红细胞检查 血液通过循环系统与全身各组织器官密切联系，参与机体呼吸、运输、防御、调节体液渗透压和酸碱平衡等各项生理活动，维持机体正常新陈代谢和内外环境的平衡。血液检验不仅是诊断各种血液病的主要依据，对其他系统疾病的诊断和鉴别也可提供许多信息，是临床医学检验中最常用的，最重要的基本内容。 红细胞是血液中数量最多的有形成分。红细胞起源于骨髓造血干细胞（CFU-S），在红细胞生成素（Epo）作用下经红系祖细胞阶段，分化为原红细胞，经过数次有丝分裂依次发育为早幼、中幼和晚幼红细胞。晚幼红细胞已丧失分裂能力，它通过脱核而成为网织红细胞。这一增殖、分化、成熟的过程在骨髓中进行约需72h。网织红细胞再经约48h即完全成熟。红细胞释放入血液后，平均寿命约120d，衰老红细胞主要在脾脏破环，分解为铁、珠蛋白和胆红素。多种原因可造成红细胞生成和破坏的平衡遭到破坏，一方面使红细胞数量减少或增多，从而引起贫血或红细胞增多症。另一方面使红细胞在质量上发生改变。通过对红细胞和血红蛋白量的检查，以及对红细胞形态学或生化改变的检查，对诊断和鉴别某些疾病具有重要临床意义。 1．红细胞计数 红细胞计数(RBC)是常用的血液基本试验。 （1）检测方法 1）手工显微镜法：是传统的红细胞计数法，用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入血细胞计数池，在显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经换算求出每升血液中红细胞数量。该法不需要特殊设备，但操作复杂、费时。 2）血液分析仪法：仪器法已成为目前细胞计数的主要方法，利用电阻抗和（或）光散射原理。仪器法比手工显微镜法更精确，