人感染猪链球菌病样品采集运送与实验室检测方案.ppt

人 感 染 猪 链 球 菌 病样品采集运送与实验室检测方案 提纲 病原学简介 样品采集与运送 实验室检测 病原学简介 分类 培养特性 生化特征 致病因子 链球菌分类 伯杰分类 6大类群，29个种 16SrRNA序列同源性和化学分类 链球菌属分类学定义 无芽孢革兰氏阳性细菌，细胞形态为球形或球杆状，直径0.5～2.0微米，细胞成对或成链排列，有些种具有荚膜。…… 链球菌分类 根据溶血现象分类 甲型溶血性链球菌：称甲型溶血或?溶血，?溶血环中的红细胞并未完全溶解。多为条件致病菌。 乙型溶血性链球菌：称乙型溶血或?溶血，?溶血环中的红细胞完全溶解，致病力强 丙型链球菌：无溶血环，一般不致病 猪链球菌α溶血(偶而也有弱β溶血或α溶血、β溶血现象均不明显 ) ，某些菌株在马血培养基上β溶血 链球菌分类 根据抗原结构的分类 兰氏分类：按多糖类抗原（C抗原）将链球菌分成A、B、C、D、E、F、G、H、K、L、M、N、O、P、Q、R、S和T群(其中缺I、J群) ，近年又增加U、V群，共20群，每个群有1个或多个种。 几乎所有群的菌株，都能从病猪体内分离得到，引起猪病并偶尔经伤口感染人的链球菌主要有 R群的2型猪链球菌 S群和D群的1型猪链球菌 F群的咽峡炎链球菌 L、S、T、U、V群链球菌等 链球菌分类 猪链球菌血清2型 兰氏分类：R群 根据菌体荚膜抗原特性不同，分为35个血清型：1/2，1～34型 致病性最强的是2型，其次为1型 2型猪链球菌 1954年英国分离 1968年命名为荚膜II型猪链球菌 分为致病力不同的株 猪链球菌培养特性 革兰氏阳性无芽胞球菌，兼性厌氧 营养要求较高，在普通培养基中生长不良，需补充血液、血清、葡萄糖等 在血清肉汤中易形成长链，管底呈絮状沉淀 在绵羊鲜血琼脂平板上37 ℃培养24小时，形成直径l～2毫米的细小菌落，灰白色，半透明，边缘整齐，凸起，光滑，α溶血（有时呈弱β溶血或溶血不明显），48小时后可有草绿色色素沉着。 猪链球菌培养特性 刚分离的猪链球菌，典型的革兰氏阳性链球菌，链长达二十多个 二代培养后细菌形态不典型，结晶紫作色不良，多为不成链球杆菌，少数呈短链状。 链球菌 猪链球菌培养特性 10℃培养不生长，45℃培养生长，60℃30分钟试验不生长 55℃30分钟即可被杀死 猪链球菌生化特征 猪链球菌生化特性往往差异较大，一般难以作为分类依据 触酶试验阴性 水解七叶苷、淀粉和精氨酸，不水解马尿酸盐和明胶 分解乳糖、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露糖，不分解阿拉伯糖、鼠李糖和甘露醇 致病因子 猪链球菌2型主要致病因子 溶菌酶释放蛋白（muramidase-released protein,MRP） 细胞外因子（extracellular factor,EF） 猪溶素（suilysin） 荚膜多糖 用南通地区分离的人源猪链球菌对兔和小白鼠的攻击试验表明，猪链可使家兔发病，并引起死亡。而小白鼠不敏感 样品采集与运送 采样器材 样品种类 血液和脑脊液标本采集方法 样品运输保存 注意事项 采样器材 无菌封闭性好的试管，最好使用负压采血管或带螺口盖的塑料管，避免使用玻璃试管。 可以清楚标记且标记不易脱落的记号笔。 可以方便采集组织标本的无菌容器。 无菌的剪刀、镊子和手术刀。 采样器材 血平皿(或者血培养瓶)。 一次性隔离服、乳胶手套、防护口罩等 带有冰袋或者冰排的安全可靠的保温运输容器 采样送检单 样品种类 现症病人不抗凝全血 现症病人抗凝血 发病4～7天、10～16天不抗凝血 脑脊液标本 尸体解剖应无菌采集肝、脾、心血、胸（腹）水 如有病死猪也可进行解剖，取肝、脾、肾、心血、肉 血液和脑脊液标本采集方法 无菌抽取血液5～10ml分置于有抗凝剂和无抗凝剂的无菌试管或者负压采血管中 按常规方法腰穿采集适量脑脊液标本置于无菌试管中 采集标本的同时接种血平皿或者血培养瓶，置于35～37℃培养 样品运输保存 所有的原始标本在转运过程中应置于安全可靠容器中。 标本应冷藏运输。 需要马上检测的标本在实验室可暂放4-8℃冰箱。 剩余标本放置于-70℃保存。 注意事项 严格无菌操作，防止标本污染。 用于分离培养的标本应在抗菌治疗前采集。 应尽可能床边接种分离培养，如无法立即接种，应在样品送达实验室后立即进行分离。 在标本采集过程中，注意安全防护。使用一次性隔离服、乳胶手套、防护口罩 采取预防措施，防止针头等锐器刺伤 如发生伤口意外暴露，应及时清洗和消毒，并预防性服药 实验室检测 猪链球菌检验程序 推片镜检 分离鉴定 检测要点 猪链球菌检验程序 病人检样（脑脊液、血液等） 增菌培养 （脑心肉汤/牛血清葡萄糖 肉汤/血培养瓶）