第3章预处理学案.ppt

三、影响液-固分离的因素 （一）、悬浮物种类 真菌：菌丝粗大 ，液固分离容易——鼓式真空过滤和板框过滤 酵母——离心 细菌——预先处理增大粒子再过滤或离心 （二）、悬浮液黏度 固液分离速度与粘度成反比 第三章小结 脏器提取液和发酵液粘度比较大（菌体，杂蛋白形成胶体） 例子从胰脏中提取的胰蛋白酶是没有活性的胰蛋白酶原，提取后需要添加一些金属离子如Ca2+ 复性，胰蛋白酶可实现自我剪切复性。后续工艺的要求，如果后期要离子交换，就不能先盐析，盐离子会影响离子交换；若后续是萃取，则可以，盐离子还有利于水相和有机相的分层！ * 左图为实验室用的组织捣碎匀浆机原理如同豆浆机或榨汁机，有螺旋刀片，加入组织和一定量提取液后，将组织打成匀浆；右图为工业上的高压匀浆机 例图为离子水化作用与胶体争夺结合水而破坏胶体水化层的示例。左图游离的正电荷争夺结合水形成右图的带水化圈的水化离子和裸露的胶体粒子。 由于大多数杂蛋白的羧基水解程度大于氨基一般蛋白质胶体带负电和，所以经常用带正电荷的金属离子来中和，促使其凝聚。无机盐用量过度，有可能是胶体吸附过多的无机盐而带正电荷之间重新产生排斥力，是胶体系统更加稳定 絮凝剂要以液体形式加入 絮凝剂如果用量太大，会完全包裹住絮凝颗粒形成带一定电荷的小球难以沉淀， 会影响蛋白胶体带电性质、絮凝剂电解度以及与胶体蛋白絮凝剂的结合性质，需要优化 pH3.0～3.5，等电点沉淀+70度热变性 CTAB即十六烷基三甲基溴化铵，是一种阳离子去污剂，具有从低离子强度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性，在这种条件下，蛋白质和中性多聚糖仍留在溶液里，在高离子强度的溶液里，CTAB与蛋白质和大多数酸性多聚糖以外的多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。因此，CTAB可以用于从大量产生粘多糖的有机体如植物以及某些革兰氏阴性菌（包括E.coli的某些株）中制备纯化DNA。 * 转鼓中心抽真空，把通过膜的滤液抽走，从中心排放。 * 结构类似于洗衣机甩筒，转速1000-4000，初级过滤，滤液不是很清澈。 管式离心机适用于颗粒杂质少，或已经经过初步过滤的料液，处理量有限 概述 一、机械法 （一）高压匀浆器 （二）高速珠磨机 此处狭缝下只可让破碎后的料液通过而玻璃珠不能通过！ 高速珠磨机，其罐体由不锈钢或陶瓷材料作成，内装一定数量的钢球或瓷球。 当罐体转动时，由于球体之间以及球体与罐壁之间的摩擦作用，使得球体随罐壁转动上升到一定高度后以抛物线方式往下落，从而对物料产生撞击和研磨作用并使物料高度粉碎。剪切力+研磨 （三）超声波振荡器 二、物理法 （一）干燥法 空气干燥、真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥 干燥后菌体细胞膜渗透性变化而自溶 （二）冻融法 细胞内冰晶引起细胞膨胀而破碎 （三）渗透压冲击法 先把细胞放在高渗溶液中，细胞发生收缩，然后将介质快速稀释或将细胞转入水或缓冲液中，细胞快速膨胀，破裂，使产物释放至溶液中 对革兰氏阳性菌不适宜 三、化学法 （一）、加入化学试剂 1、用碱处理 ：可以溶去除细胞壁以外的大部分组分（碱 裂解法提取DNA） 2、用脂溶性有机溶剂：溶解细胞膜上的脂质化合物，使细胞结构破坏 稳定性 3、表面活性剂 （二）酶解法 （三）制成丙酮粉：丙酮快速脱水，破坏蛋白质与脂质结合键 亦称丙酮干制剂。是微生物或生物组织，有时是蛋白质，酶的提取物用丙酮脱水的干制品。 四、选择破碎方法的依据 （一）、规模及成本 工业规模：高压匀浆和珠磨 （二）、目的物的稳定性 （三）、破碎效果和产物释放率 第三节 液-固分离 一、过滤 （一）过滤方式 1、常规过滤 2、错流过滤 错流过滤 （二）、过滤设备 1、板框过滤机 2、真空鼓式过滤机 2真空鼓式过滤机 （三）过滤介质和助滤剂 1、过滤介质：滤布或膜 2、助滤剂：要求为惰性物质、无毒、有一定细度及硬度，成本低廉。 常用有：硅藻土、纸浆、石棉、纤维素等 二、离心分离 1、过滤式离心机 2、沉降式离心机 3、管式离心机 第三章 生物材料的预处理和液固分离 第一节 生物材料的预处理 1、含量低 如胰岛素在胰脏中的含量为0.02%，胆汁中胆红素含量为0.05~0.08% 往往生物活性越高，含量越低！（为什么？） 2、杂质多 ：菌丝体细胞碎片、未用完的培养基、各种杂蛋白胶状物、色素、金属离子和其他代谢物 3、易变性失活（杂质多） 预处理的目的就是要初步除去杂质，改变滤液性质（降低粘度），达到目的产物的初步分离浓缩，以利于后续的分离和精制过程。 为什么需要预处理？ 一、选择预处理方法的依据 1、生物活性物质来源、存在状态