基因重组实验守则.doc

基因重組實驗安全守則摘要（附件三） 一、定義 1.『基因重組實驗DNA、RNA及其他遺傳物質之重組實驗。 2.『基因重組實驗DNA組合，然後把這個組合移入另一活細胞體，使重組DNA得以增殖的實驗。不包括在自然界已存在，含外源性DNA之活細胞或同等之遺傳物質。 3.『大量培養實驗』是指在基因重組實驗基因重組實驗重組DNA基因重組實驗DNA運送至宿主的DNA。 6.『宿主－載體系統』是指宿主和載體的組合。 7.『DNA供應體DNA的細胞或微生物。當用RNA做模板合成DNA後，再插入載體的情況，則是指提供RNA的細胞或微生物。 8.『重組體』是指攜帶重組DNA之病毒、細胞或生物體。 9.『已確認DNA』是指從DNA供應體DNA，與選殖及化學合成的DNA。 10.『未確認DNA』是指從DNA供應體DNA。 11.『基因轉殖動物』是以重組DNA[1]以動物為宿主之實驗。 [2]把重組DNA[3]以上述的實驗所轉殖的動物作為實驗材料。 12.『基因轉殖植物』是以重組DNA[1]以植物為宿主之實驗。 [2]把重組DNA[3]以上述的實驗所轉殖的植物作為實驗材料。 13.『緊急避難室』是指在實驗區域內備有在緊急狀況時能維持工作人員生命安全裝置的密閉空間。 14.『安全操作裝置』是指防止實驗操作時所產生之污染性氣霧向外流出之裝置或箱形設計。（見附表一所規定的生物安全操作裝置規格）。 15.『研究機構主管』為監督基因重組實驗 16.『研究機關主管』為監督基因重組實驗二、生物性防護（Biological Containment） 一、實驗之區別 依據宿主-載體系統以及用於提供DNA之生物種類將實驗區分如下： 病毒類實驗： 使用病毒之實驗（使用病毒於宿主-載體系統之實驗以及會產生感染性病毒體之實驗）。 [1] 使用微生物及培養細胞為宿主的實驗： 以微生物（包括立克次小體及披衣菌，但病毒類除外，以下類同），及培養細胞（限於不以分化至成體為目的者）為宿主之實驗（載體用病毒類實驗以及會產生感染性病毒體之實驗除外）。 [2] 使用動物及植物為宿主的實驗： 以動物、植物及培養細胞（限於以分化至成體為目的者）為宿主之實驗（載體用病毒類實驗以及會產生感染性病毒體之實驗等除外）。 表3-1 實驗之區別 實驗之區分 宿主-載體系統 DNA供應體-載體系統之實驗以及會產生感染性病毒體實驗） 培養細胞類實驗 使用微生物及培養細胞為宿主的實驗 微生物【包括立克次小體及披衣菌，但病毒類（指真菌以外之真核生物之病毒和類病毒，及脊椎動物之原蟲類）除外，以下類同】，及培養細胞（限於不以分化至成體為目的者） 非病毒類者 病毒類以外之DNA來源以及DNA雖來自病毒類，但卻不會產生感染性病毒體者 使用動物及植物為宿主的實驗 動物、植物及培養細胞（限於以分化至成體為目的者） 二、生物性防護之層級 病毒之防護： 病毒之安全防護層級，依宿主-載體在生物學上之安全程度而定，分B1及B2二個層級。 [1] B1層級 包括（1）由在自然條件下生存能力低的宿主以及對宿主之依賴性高，且不容易轉移到其它細胞的載體所構成，其重組體不會傳播擴散到自然環境之宿主-載體系統，（2）由所用宿主-載體之遺傳學、生理學性質，及在自然環境條件下的生態學性質足以確認對人類之生物學安全性甚高之宿主-載體系統。 表3-2　B1層級之宿主-載體系統 一、EK-1： 以遺傳學及生理學性質非常清楚，不具毒性且在自然條件下生存能力極低之大腸菌E. coli K12或其突變株為宿主，以無接合（conjugation）能力，不會轉移給其它菌株之質體或噬菌體為載體所構成之宿主-載體系統。所用之宿主須不含有具接合能力之質體或一般導入之噬菌體。 二、SC-1： 以酵母菌S. cerevisiae之實驗室保存品系為宿主，以質體為載體所構成之宿主-載體系統。 BS-1： 以枯草菌 B. subtilis Marburg 168株帶有對胺基酸或核酸之雙重以上營養需求的突變株（品系）為宿主，以無接合能力，不會轉移給其它菌株之質體或噬菌體為載體所構成之宿主-載體系統。 Baculovirus為載體所構成之宿主-載體系統。 [2] B2層級 除了必需合乎B1的條件外，其所用宿主還必需在自然條件下的生存能力特別低，其所用載體對宿主的依賴性特別高，其重組體確認不會傳播擴散到自然環境。本守則第22頁表3-3所列的宿主-載體系統均屬於B2層級。在專家的指導下，利用安全性特別高的動物或植物之培養細胞（限於不以分化至成體為目的者）的宿主載體系統（會產生感染性病毒體者除外）進行實驗的時候，該宿主-載體系統需用B2層級操作。 根據所使用之宿主-載體系統，以及DNA供應體DNA為從細胞抽取的DNA、選殖之DNA