用弱阳离子交换色谱对还原变性溶菌酶复性条件的优化-西北大学.docVIP

离子交换色谱对溶菌酶复性的色谱条件优化 刘红妮，龚波林，耿信笃 （西北大学 现代分离科学研究所/分离科学陕西省重点实验室，陕西 西安，710069） 摘要：对离子交换色谱中影响溶菌酶（Lys）复性的各个因素逐一进行考察。结果表明，当流动相中含有3.0 mol/L脲、洗脱剂(NH4)2SO4、还原型/氧化型谷胱甘肽（GSH/GSSG）比例为5:1、流速2.0 mL/min、pH 8.0、温度25 ℃时，在蛋白初浓度为20.0 mg/mL时还原变性Lys的活性回收率可达95.4%。认为此方法对蛋白的复性效率优于稀释法。 关键词：蛋白复性；溶菌酶；离子交换色谱 中图分类号：O652.63 文献标识码：A 文章编号：1000-274X(2004)0109-09 蛋白质折叠是生物化学中的前沿课题。它不仅涉及生命科学中生命是如何起源的重大理论问题，而且对于基因重组蛋白质的复性等应用也有十分重要的意义。传统的蛋白质复性方法有稀释法、透析法。近年来报道了一些新的复性方法，包括超滤法[1]、分子伴侣法[2]及人工分子伴侣[3,4]法、添加折叠促进剂法（如PEG[5]、L-精氨酸[6]、四氢糠醇[7]等帮助蛋白复性）及液相色谱法（LC）[8,9]。其中，LC法是近年来发展最快的复性方法之一，其优点在于利用蛋白质以单分子状态吸附于固定相上，避免或减小单个分子间的相互作用，