12DNA的生物合成试卷.pptVIP

第十二章 DNA的生物合成 第一节 DNA复制的基本规律 第二节 DNA复制的反应体系 第三节 DNA复制的过程 第四节 逆转录和其他复制方式 第五节 DNA的损伤与修复 中心法则(the central dogma) 复制(replication)：以亲代DNA为模板合成子代DNA的过程。 第一节 DNA复制的基本规律 DNA复制的特征：半保留复制，双向复制， 半不连续复制，高保真性 一、半保留复制： DNA复制的三种可能方式 证据：1958年，Meselson和Stahl研究了经15N标记3个世代的大肠杆菌DNA，首次证明了DNA半保留复制。 概念：DNA复制时，两条单链的氢键断裂，各自作为模板合成新的DNA双链，这样新合成的子代DNA与亲代DNA碱基序列一致，其中一条链完全来自亲代DNA，另一条链重新合成。 半保留复制的意义： 按半保留复制方式，子代DNA与亲代DNA的碱基序列一致，保证子代获得亲代的全部遗传信息，体现了遗传的保守性，是物种稳定性的分子基础。 遗传的保守性是相对的，存在着变异现象。 二、双向复制： 概念：复制时，DNA从起始点向两个方向解链，形成两个延伸相反的复制叉，称为双向复制。 复制叉(replication fork)：复制时双链打开，分成两股，各自作为模板，子链沿模板延长所形成的Y字形的结构。 原核生物：基因组是环状DNA，只有一个复制起点（Ori），以双向等速复制为主。 真核生物：染色体DNA为线状，有多个复制起点（ARS），复制为双向等速。 复制子(replicon)：两个相邻复制起始点之间的DNA片段，是独立完成复制的功能单位。 三、半不连续复制 概念：DNA复制方向总是5′→3′，以解链方向为标准，一条母链是3′→5′走向，以其为模板的子链延伸方向与解链方向一致，连续合成；另一条以5′→3′走向链为模板的子链延伸方向与解链方向相反，其合成是不连续的，先形成许多不连续的片段，最后连成一条完整的DNA链。 领头链 (leading strand)：顺着解链方向生成的子链，复制是连续进行的，这股链称为领头链 ，也叫前导链。 随从链 (lagging strand)：复制方向与解链方向相反，复制是不连续进行的该股链称为随从链，也叫后随链。 冈崎片段(Okazaki fragment)：随从链上不连续合成的DNA片段。 原核生物：1000～2000个核苷酸 真核生物：100～200个核苷酸 第二节 DNA复制的反应体系 一、复制的化学反应—DNA聚合反应： 以4种脱氧核苷三磷酸(dNTP)为底物； DNA新链生成需引物和模板； 新链的延长只可沿5′→3′方向进行。 二、反应体系 1、底物：dNTP(dATP、dGTP、dCTP、dTTP) 2、模板：解成单链的DNA母链 3、引物：提供3′-OH末端的寡核苷酸(常为RNA)。因为DNA聚合酶没有催化两个游离dNTP聚合的能力，故DNA复制需合成RNA作为引物，它可提供3′-OH末端，在DNA pol 催化下逐一加入dNTP而延长DNA子链。 4、引物酶：以DNA为模板合成一段RNA引物，实质是依赖DNA的RNA聚合酶。 5、DNA拓扑异构酶：既能水解，又能连接磷酸二酯键。解超螺旋，克服复制过程中的打结、缠绕现象。 解链过程中，DNA分子会出现拧紧、打结、缠绕、连环等现象。 拓扑异构酶?：切断DNA双链中一股链，使DNA解链旋转不致打结；适当时候封闭切口，DNA变为松弛状态，反应不需ATP。 拓扑异构酶II：切断DNA分子两股链，断端通过切口旋转使超螺旋松弛，利用ATP供能，连接断端，DNA分子进入负超螺旋状态。 6、DNA 解螺旋酶 /解链酶（DNA helicase) 通过水解ATP获得能量，解开双链DNA。 7、单链结合蛋白(SSB,single-strand binding protein)：稳定已被解开的DNA单链，阻止复性和保护单链不被核酸酶降解。 8、DNA聚合酶：依赖DNA的DNA聚合酶，是以DNA为模板的DNA合成酶，在模板的指导下，以dNTP为底物，沿着引物 3?-OH按5? ? 3? 方向合成DNA。 原核生物DNA聚合酶特征（大肠杆菌） 现已知大肠杆菌存在DNA聚合酶I、II、III、IV和V pol IV和V主要在SOS修复中起作用。 DNA-pol Ⅰ（109kD）：大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ是单一多肽链的多功能酶，具有3种酶活性。其聚合酶活性只能催化延长约20个核苷酸左右聚合。 功能：校读，去除RNA引物，填补空隙，参与DNA损伤修复。 DNA-pol II（120kD）：含一条多肽链，但只在无pol I 及pol Ⅲ