大肠杆菌感受态细胞的制备1试卷.pptVIP

* （一般通过检测OD600来控制。DH5?菌株OD600为0.5时细胞密度是5×107/ml）； （这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的）； 大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒DNA的转化 实验目的 通过本实验学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞和外源质粒DNA转入受体菌细胞的技术。了解细胞转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。 原理 感受态细胞(Competent cells): 受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl等化学试剂）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞(competent cell) 。 细菌处于0℃的CaCl2低渗溶液中，会膨胀成球形，细胞膜的通透性发生变化，转化混合物中的质粒DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物黏附于细胞表面，经过42℃短时间的热激处理，促进细胞吸收DNA复合物，在丰富的培养基上生长数小时后，细胞复原并分裂增殖，在选择培养基上可获得所需的转化子。转化效率为106 ～107转化子/μg DNA。 受体细胞： 也称宿主，是重组子扩增及表达的场所，分为原核细胞和真核细胞两类。 原核细胞主要是大肠杆菌、链霉菌及枯草杆菌等（原核细胞不但是重组子复制扩增的场所，也可以作为外源基因的表达系统）。 真核细胞包括酵母、哺乳动物细胞及昆虫细胞等。 宿主细胞是基因克隆载体的增殖