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HPV分子生物学及宫颈病变病理诊断 彭振武 PZW7509@163.COM 广州安必平医药科技有限公司 一，HPV简介 二，HPV与宫颈癌的关系 三，HPV相关细胞学形态改变及判读要点 四，HPV检测方法及宫颈病变的病理诊断 五，HPV疫苗的研究进展 （一）HPV简介 1.完整的病毒颗粒为一个感染单位，外形呈20面体对称型，外壳有72个衣壳体。 2.HPV基因组为环状双链DNA，含有近8000个碱基对。分为早期区，晚期区和长控区。 （二）HPV与宫颈癌的关系 宫颈癌是第一个被确定有单一明确病因的癌症，即高危型HPV感染。 HPV感染普遍存在，但是引起的宫颈癌却相对少见。 高危型HPV总感染率大概在10%，15岁到25岁感染率最高。 HPV感染平均为6-9个月，70%的HPV感染在一年内清楚，两年内的清除率可达90% HPV感染引起的低度病变（CIN1）不是癌前病变，大多会自然转愈，对于任何致癌性HPV，诊断CIN1并不意味着发展成CIN3的风险比活检阴性者高。 HPV病毒量的多少跟宫颈癌的发生有一定的相关性，但是不成正比，不能预测疾病的进展。 有效预防HPV感染，就能减少甚至不得宫颈癌。 ①通过微小破损感染上皮组织。 ②通过胞吞作用使整个病毒颗粒侵入上皮基底层细胞，继而通过不明的机制被传送到细胞核。 ③正常情况下，病毒基因中的E1，E2，E4，E5低表达，有利于病毒基因组的维持和细胞增生。表达水平增高促进病毒基因组复制。 ④随着宿主角质细胞开始分裂并逐渐分化为上皮表层，L1和L2蛋白表达促使病毒组装形成感染性病毒颗粒，而E4高表达则使细胞胞浆破坏，凹陷，促进病毒释放。 ① 高危型HPV病毒持续性感染。 ② 病毒DNA与宿主细胞DNA发生整合，病毒与之整合的部 位位于E2编码区。 ③ HPV整合导致E2片段缺失，失去了对E6，E7的正常调控，导致其过度表达。 ④ E6与P53结合并使之降解，并能阻止和干扰细胞凋亡，引起细胞无限增生并向恶性转化。 ⑤ E7与pRB结合，使E2F得以释放，从而使细胞周期由G1期向S期转化，细胞周期失控而发生永生化。 ⑥ E6，E7编码的原癌蛋白表达，导致人类染色体端粒体酶逆转录酶基因（hTERC）扩增，维持端粒长度，细胞永生，免于凋亡，发生癌变。 宫颈癌发生过程： （三）HPV相关细胞学形态改变及判读要点 多数HPV感染并没有细胞学异常，大约只有30%的HPV感染会产生相应的细胞病理学变化。 HPV引起的细胞学形态改变不仅仅表现挖空细胞特征，还包括ASC和HSIL的病变特点。 挖空细胞只说明有HPV感染，但无法分清楚是低危型还是高危型。 HPV分子生物学行为对应TBS报告术语。 典型的挖空细胞判读为LSIL，不典型的挖空细胞判读为ASC-US或ASC-H. 理解LSIL的定义，其实就是要弄清楚以下这个问题： 组织学的CIN1指的是下1/3的细胞异型，而与之对应的LSIL则是表层细胞形态的异常，如何解释？ LSIL LSIL 糖原溶解细胞VS挖空细胞 LSIL（HPV病毒游离状态，一过性感染） 细胞学诊断的要点： 1.细胞成熟，为表层细胞来源。 2.核周空晕透亮，为胞浆塌陷或被破坏造成。 ASC-US（可疑HPV一过性感染，无典型挖空表现） 细胞学诊断要点： 1.核有一定异型，有挖空趋势，但核周空晕不透亮。 2.成片聚集的表层细胞，核轻度增大或双核，可伴有角化不全现象。 HSIL（HPV病毒整合状态，持续性感染） 细胞学诊断要点： 1.高核浆比。 2.核的异型性，主要体现在核膜的不规则以及核染色质增粗。 CIN3 CIN3 CIN3（ HPV病毒整合状态，持续感染，向宫颈癌进展） 组织学诊断要点： 1.核异型明显（肿瘤异倍体细胞的表现）。 2.中表层细胞出现病理性核分裂像。 3.全层细胞密度增加，极性紊乱，丧失正常的组织结构。 4.表层细胞不出现典型的挖空细胞形态。 （四）HPV检测方法及宫颈病变的病理诊断 HPV检测： 1.病毒DNA检测 2.病毒mRNA检测 3.病毒相关蛋白检测 4.病毒靶向检测 低危型HPV主要见于生殖器疣，常见的型别为6型和11型。 高危型HPV与癌前病变和宫颈癌相关，常见的型别为16型和18型。 检测方法有分型检测与不分型检测。 操作步骤： ①裂解→②杂交→③捕获→④抗原抗体反应→⑤信号放大→⑥结果判读 HC2结果判读：≥1.0pg/ml为阳性，相当于5000拷贝。 如何正确理解HC2的检测结果？ PCR-RDB