实时荧光定量PCR题稿.pptVIP

* * 常规PCR重要的是终产物的定性分析，虽然有些能够根据中产物半定量，但是不够精确；实时荧光定量PCR则是伴随PCR反应监测每一个循环的产物量变化，通过对数据的分析达到队初始模板进行精确的定量。 * 介绍图 说明指数扩增的重要性 * 人为规定的阈值，去哪一点计算？消除背景干扰，在指数扩增期内， 是为了引入C(t)值概念 实 时 定 量 P C R 技 术Real time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR 微生物131 沈涛 基本原理： 在RT-qPCR中,对整个PCR反应扩增过程进行了实时的监测和连续地分析扩增相关的荧光信号,随着反应时间的进行,监测到的荧光信号的变化可以绘制成一条曲线。 在PCR反应早期,产生荧光的水平不能与背景明显地区别,而后荧光的产生进入指数期、线性期和最终的平台期。RT-qPCR可行性定量是在PCR扩增的指数期进行的。首先需设定一定荧光信号的域值,一般这个域值是以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号,荧光域值的缺省设置是3~15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。 域值 → Ct ↑ 常规PCR vs RT-qPCR 常规PCR：借助电泳对扩增反应的终产物进行半定量及定性分析 RT-q