20111220111212145011.ppt-广东省低碳化学与过程节能重点实验室.ppt

几个问题 色谱分离的原理 色谱定性原理、方法 色谱定量原理、方法 为什么需用质谱等其他方法辅助定性 硅胶固定相分离苯，甲苯，乙苯，丙苯，丁苯 流动相： 干燥正庚烷 1份水饱和的正庚烷 2份干燥正庚烷 水饱和的正庚烷 改变流动相的 组成可改变分离 的选择性 4 应用 ?具有不同官能团的化合物 ?具有相同官能团，但数量不同的化合物 ?异构体 例：几种取代位置不同的硝基苯胺的分离。在硅胶吸附剂上的滞留顺序： 邻位间位对位 邻硝基苯胺 间硝基苯胺 对硝基苯胺 适合分离的物质 二 分配色谱法 1 分离原理 K不仅与固定相的种类有关，也与流动相的种类有关 2. 固定相 A. 固定液涂渍在多孔载体表面 常用固定液 β,β’-氧二丙睛 聚乙二醇 三甲撑乙二醇 角鲨烷 固定液在使用中易流失 B. 键合固定相 ODS(C18)键合相 硅胶 十八烷基氯硅烷 非极性 硅烷化反应 使用pH范围： 2-8 固定相非常稳定，在使用中不易流失。 键合固定相类型 疏水基团 烷烃（C8和C18）、苯基等 极性基团 丙氨基 氰乙基 醚和醇等 固定相极性流动相极性 正相分配色谱 组分极性越大，保留时间越长 反相分配色谱 固定相极性流动相极性 组分极性越小，保留时间越长 例：甲苯和苯酚的分离。流动相：甲醇-水 出峰顺序：苯酚，甲苯 出峰顺序：甲苯，苯酚 十八烷基键合相 二醇基键合相 高压泵 流动相溶剂 废液 色谱柱 进样口 检测器 三、高效液相色谱仪 一 高压输液系统 1 高压泵 要求 输出压力高 平稳、脉冲小 流量稳定可调 耐腐蚀 2 梯度洗脱装置 低压梯度 高压梯度 通过改变流动相的组成来调整组分的k值，改变分离因子α值，以达到最短时间内得到最佳分离的目的。 梯度洗脱 等度洗脱与梯度洗脱 梯度洗脱的特点 ?改善分离, 加快分析速度； ?改善峰形, 减少拖尾; ?可能引起基线漂移 分配比变化范围宽的 复杂样品应采取 梯度洗脱方式分离 3 贮液瓶及流动相 1) 对样品有一定的溶解度，以防在柱头产生沉淀。 2) 适用于所选择的检测器。 3) 化学惰性好，以免破坏固定相。 4) 低粘度，增加样品的扩散系数，提高柱效。 5) 纯度高。溶剂不纯会增加检测器噪声，产生伪峰。 对流动相溶剂的一般要求 二 进样系统 准备状态 进样状态 ?六通阀进样 装置 ?自动进样器 三 色谱柱 内径：1～6 mm，柱长：5～30 cm； 柱填料粒径：5μm 分离柱 四 检测系统 1 紫外吸收检测器 氘灯 光栅 流通池 测量光电二极管 参比光电二极管 紫外检测器灵敏度高，精密度及线性范围较好 ，可用于梯度洗脱。 流动相选择有限制。仅适用于测定有紫外吸收的物质。 254nm 2 荧光检测器 ?灵敏度高，选择性好，可用于梯度洗脱。 缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质 可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、色氨酸、卟啉、儿茶酚氨等（具有对称共轭体系） 4 示差折光检测器 ?利用组分与流动相的折射率之差进行检测。 ?通用性好，灵敏度较低，不适用于梯度洗脱。 §4 色谱技术的应用 气体、易挥发的物质 ，一般沸点在450℃以下，分子量小于450的有机物 气相色谱适用对象 高沸点、不能气化、热不稳定的物质。 液相色谱适用对象 ?卫生环境监测：气、水 ?食品检验：啤酒，清酒，葡萄酒，酱油、酸奶等 ?生化检验：血清、尿等 ?医药品检验： 一、分析检验 ?农药分析： 二、有机合成中的应用 ?原料的纯度检测 ?合成中间体的分析 ?合成产物的分析、分离 ?合成过程的监测 三、材料研究中的应用 ?高分子材料中残留单体含量测定 间甲酚或氯苯为内标物 有机溶剂抽提或萃取 ?高分子材料中添加剂的测定 1：BHT 2：1076 3：1010 23.9 31.8 17.1 27.2 峰面积直接归一化定量结果 24.1 31.3 17.5 27.0 校正因子归一化定量结果 0.98 0.96 1.00 0.97 fi 105 140 75 120 峰面积 邻二甲苯 间二甲苯 对二甲苯 乙苯 组分 C8芳烃异构体归一化定量分析 (2)外标法(校准曲线法) 或 ?不使用校正因子 ?需准确控制进样量、 载气流速等操作条件 ?适合测定大批量样品 1 2 3 4 5 6 Sample (3)内标法 对内标物的要求： （a）试样中不含有该物质； （b）与被测组分性质比较接近； （c）不与试样发生化学反应； （d）出峰位置应位于被测组分附近，且无 组分峰影响。 准确度高，受进样量和操作条件影响小 优点 Sample Standard s i