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吸光光度法 吸光光度法基本原理 光度计及其基本部件 显色反应及显色条件的选择 吸光度测定条件的选择 吸光光度法的应用 紫外吸收光谱法简介 吸光光度法 基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法称之为吸光光度法。 包括 比色法 可见分光光度法 紫外分光光度法 红外光谱法 吸光光度法 可见吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围400?750 nm ，主要用于有色物质的定量分析。 紫外吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围200?400 nm（近紫外区） ，可用于结构鉴定和定量分析。 红外吸收光谱：分子振动光谱，吸收光波长范围2.5?1000 ?m ,主要用于有机化合物结构鉴定。 吸光光度法 特点 灵敏度高 适用于微量组分的测定 相对误差约为 2 %一 5 % 测定迅速 仪器操作简单 价格便宜 应用广泛 吸光光度法 / 吸光光度法基本原理 光的波段划分 吸光光度法 / 吸光光度法基本原理 物质对光的选择性吸收 吸光光度法 / 吸光光度法基本原理 吸光光度法 / 吸光光度法基本原理 当一束光照射到某物质或其溶液时，组成该物质的分子、原子或离子与光子发生“碰撞”，光子的能量被分子、原子所吸收，使这些粒子由最低能态（基态）跃迁到较高能态（激发态） 吸光光度法 / 吸光光度法基本原理 物质对光的选择性吸收 分子、原子或离子具有不连续的量子化能级， 仅当照射光的光子能量与被照射物质粒子的基态和激发态能量之差相当时才能发生吸收。 不同的物质微粒由于结构不同而具有不同的量子化能级，其能量差也不相同。 所以物质对光的吸收具有选择性 吸光光度法 / 吸光光度法基本原理 吸光光度法 / 吸光光度法基本原理 吸收曲线（吸收光谱）----物质对不同波长光的吸收能力 的描述 以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图 最大吸收波长----同一种物质对不同波长光的吸光度不同。吸光度最大处对应的波长称为最大吸收波长λmax 不同浓度的同一种物质，其吸收曲线形状相似λmax不变 在吸收峰及附近处的吸光度随浓度增加而增大 而对于不同物质，它们的吸收曲线形状和λmax则不同 吸光光度法 / 吸光光度法基本原理 吸光光度法 / 吸光光度法基本原理 定性分析----不同物质其吸收曲线的形状和最大吸收波长各不相同。根据这个特性可用作物质的初步定性分析 定量分析---- 不同浓度的同一物质，在吸收峰及附近处的吸光度随浓度增加而增大。根据这个特性可对物质定量分析。若在最大波长处侧定吸光度，则灵敏度最高。 吸收曲线是吸光光度法定量分析时选择测定波长的重要依据。 吸光光度法 / 朗伯一比尔定律 吸光光度法 / 朗伯一比尔定律 A＝lg（I0/It)= k b c 式中A：吸光度；描述溶液对光的吸收程度； b：液层厚度(光程长度)，通常以cm为单位； c：溶液的摩尔浓度，单位mol·L－１； k：摩尔吸光系数，单位L·mol－１·cm－１； 或: A＝lg（I0/It)= a b c c：溶液的浓度，单位g·L－１ a：吸光系数，单位L·g－１·cm－１ a与k的关系为： a =k / M （M为摩尔质量） 吸光光度法 /朗伯一比尔定律 /透光度(透光率)T 吸光光度法 / 朗伯一比尔定律 朗伯一比尔定律不仅适用于溶液，也适用于其他均匀非散射的吸光物质（气体或固体），是各类吸光光度法定量分析的依据 K 可作为定性鉴定的参数，也可用以估量定量方法的灵敏度：K 值愈大，方法的灵敏度愈高。由实验结果计算 K 时，常以被测物质的总浓度代替吸光物质的浓度，这样计算的 K 值实际上是表观摩尔吸收系数。 吸光光度法 / 朗伯一比尔定律 吸光光度法 / 朗伯一比尔定律/ 吸光度的加和性 在多组分体系中，如果各种吸光物质之间没有相互作用，这时体系的总吸光度等于各组分吸光度之和，即吸光度具有加和性 吸光光度法 /偏离比尔定律的原因 在吸光光度分析中，经常出现标准曲线不呈直线的情况，特别是当吸光物质浓度较高时，明显地看到通过原点向浓度轴弯曲的现象(吸光度轴弯曲)。 这种情况称为偏离朗伯-比尔定律。若在曲线弯曲部分进行定量，将会引起较大的误差。 吸光光度法 /偏离比尔定律的原因 非单色光引起的偏离 朗伯-比尔定律只适用于单色光，但由于单色器色散能力的限制和出口狭缝需要保持一定的宽度，所