水稻磷胁迫响应基因OsRCI2-9的克隆及功能鉴定解剖.pdf

中国农业科学 2015,48(5):831-840 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.05.01 水稻磷胁迫响应基因 OsRCI2-9 的克隆及功能鉴定 任鸿雁，魏 强 （陕西师范大学生命科学学院，西安 710119 ） 摘要：【目的】分析水稻OsRCI2-9 的功能，进而解析其耐低磷胁迫的作用机制，以利于磷高效作物的改良与 选育。【方法】通过对比分析水稻磷信号中心调控因子OsPHR2超表达（ OsPHR2(O) ）与干涉（OsPHR2(Ri) ）转基因 植株和野生型植株基因芯片数据，发现一个在 OsPHR2(O)背景下诱导表达的RCI2家族基因——OsRCI2-9，首先利 用实时荧光定量 PCR 对芯片数据进行验证。然后根据 TIGR 上的基因序列设计引物，扩增其全长 cDNA；进而利用 DNAStar来寻找其开放阅读框，并利用TMHMM2.0对蛋白序列的跨膜结构进行预测；在Phytozome中利用 BLAST 搜 索拟南芥和玉米中的同源基因，并将 OsRCI2-9 与拟南芥 RCI2、玉米 RCI2 家族的蛋白序列利用Clustal X 1.8 进 行多重序列比对和同源性分析；利用MEGA 5.2.1软件的最大似然法对同源蛋白构建进化树；利用植物顺式作用元 件数据库 PLACE 分析启动子序列中的顺式作用元件；利用 RT-PCR 和实时荧光定量 PCR 检测 OsRCI2-9 在不同胁迫 处理条件下的表达模式；将 OsRCI2-9 的cDNA序列连入带有CaMV 35S启动子的pCAMBIA1300表达载体中构建其超 表达载体并发展转基因材料，对其表型进行分析，并对转基因植株的有效磷进行测定。【结果】 OsRCI2-9 位于水 稻第 6 染色体上，基因全长 237 bp，由 2 个外显子和 1 个内含子组成，编码 78 个氨基酸。OsRCI2-9 含有 2 个跨 膜结构域，其在序列上与玉米ZmRCI2-2、ZmRCI2-7和ZmRCI2-8同源性较高；通过启动子序列分析发现 OsRCI2-9 启动子含有干旱、低温，ABA、细胞分裂素、赤霉素及磷饥饿响应等元件；RT-PCR和实时荧光定量PCR发现 OsRCI2-9 受到缺磷处理的强烈诱导，在根中 OsRCI2-9 还受到缺钾和缺铁的少量诱导及缺氮的微量抑制。进一步研究发现在 正常磷浓度下，OsRCI2-9 超表达转基因植株与野生型相比，表现为生长缓慢，分蘖数减少，而在低磷条件下，表 型与野生型差别不大。通过测定有效磷含量发现 OsRCI2-9 超表达转基因植株在正常磷浓度与缺磷条件下较野生型 植株有效磷含量均有明显的提高。【结论】 OsRCI2-9 参于了植物体内磷平衡调控。 关键词：水稻；RCI2家族；胁迫响应；磷 Isolation and Functional Analysis of Phosphate-Responsive Gene OsRCI2-9 in Oryza sativa REN Hong-yan, WEI Qiang (College of Life Sciences, Shaanxi Normal University, Xi’an 710119) Abstract: 【Objective 】 The objective of this study is to analyze the function of OsRCI2-9