13看第十三章植物细胞的遗传转化答题.ppt

植物遗传转化系统的建立 张志胜 Guangdong Provincial Key Laboratory of Plant Molecular Breeding， South China Agricultural University， Guangzhou 510642，China Tel E-mail zszhang@scau.edu.cn 内 容 一、 植物遗传转化系统概述 二、植物遗传转化受体系统的建立 三、 植物基因转化的方法 四、转基因植株的再生及其检测 一、 植物遗传转化系统概述 (general situation of plant genetic  transformation system) 1、植物遗传转化（plant genetic transformation）是指利用重组DNA技术，将外源基因导入植物细胞，外源基因与受体植物染色体整合并稳定遗传和表达的过程或技术。 植物遗传转化技术是分子育种的核心技术之一，已经成为培育植物新品种的有效方法之一. 1、怎样开展遗传转化工作 确定育种目标 1、植物遗传转化常用的受体 （1） 植物组织和器官：幼叶、未成熟子叶、子叶、未成熟胚、成熟胚、子叶节、子房、下胚轴、茎尖、花粉、球茎、根和鳞茎等。 （2）中间繁殖体： （3）原生质体 烟草叶盘遗传转化体系，其阳性转基因植株频率可达 5 7.1% （张宁等，2004） 大白菜，最高转化频率可达5.74%（杨广东等，2002） 水稻成熟胚、幼胚、幼穗遗传转化受体系统。幼胚最高，基因枪法比农杆菌介导法高（王芋华等，2004）。 （2）中间繁殖体受体系统 （4）生殖细胞受体系统 特点 A、利用单倍体遗传转化受体系统进行基因转化，避免了基因显隐性的影响，有利于基因的充分表达，通过染色体加倍后即可使基因纯合，缩短了目的基因纯合的时间，加快了转基因育种过程； B、花粉管通道法和子房注射法由于操作简单，受实验室条件限制较小，已成为目前国内常用的转基因方法之一，同时，花粉管通道法是利用植物自身的有性生殖过程，有利于将现代的分子育种与常规育种紧密结合，也有利于目的基因在转基因后代中的稳定表达； C、受体取材受到季节的影响大。利用花粉管通道法等进行遗传转化只能在短暂的开花期内进行，这是限制该系统应用的主要原因之一。 4、遗传转化受体系统的建立 ●培养基 ◆基本培养基 ◆激素的选择： 生长素（2，4-D、NAA、 IAA、IBA和2，4，5-T）和细胞分裂素（ ZT、BAP、6-BA、2iP和 KT） ◆糖的种类和浓度 ◆有机附加物的选择 ●培养条件 培养条件是影响高频再生系统的重要因素 影响组培的效果 影响变异频率 温度 光照：强度、光周期和光质 高频再生系统的评价 中间繁殖体诱导率 中间繁殖体增殖率 植株分化率 变异率 移栽成活率 ③抗生素敏感性试验 选择对抗生素敏感的受体材料是建立高效稳定转基因受体系统的保证（农杆菌介导法） 外植体 诱导培养基 含不同浓度抗生素培养基 植株再生 综合评价 ④农杆菌敏感性试验 选择对农杆菌敏感的受体材料是建立高效稳定转基因受体系统的关键（农杆菌介导法） 不同植物材料 农杆菌菌株浸染 敏感性评价 （结瘤或发根率，发生时间，生长状况等） （2）受体系统常见的问题及其解决途径 ①再生能力及其遗传稳定性 选择合适外植体 减少继代次数 选择合适培养基等 ②愈伤组织褐变 ③再生植株玻璃化 三、植物遗传转化的方法 （1）载体转化系统：农杆菌介导法、植物病毒载体法； （2）直接转化系统：化学法（PEG法和脂质体法）和物理法（基因枪法、电击法和显微注射法等）； （3）种质转化系统：花粉管通道法、萌动种胚浸泡法、子房和胚囊注射法等。 (一）农杆菌介导转化法 1、根癌农杆菌介导转化原理 农杆菌能浸染植物细胞并将其中所带有的质粒中一部分T-DNA导入植物细胞中，并整合到植物核 DNA上，然后在植