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1、动物细胞培养 (2)动物细胞的培养过程 2、为什么要用胰蛋白酶对取出的动物组织进行处理? 植物组织培养和动物细胞培养的比较 单细胞不如群体细胞 原代培养细胞和有限细胞系不如连续细胞系、转化细胞系和肿瘤细胞 1.动物细胞全能性的表现程度 2.动物难以克隆的原因 5、单克隆抗体制备过程 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选,继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 体外培养 注射到小鼠腹腔 单克隆抗体 书图P32 利用一个细胞的细胞核(核供体)来取代另一细胞中的细胞核,形成重建的“合子”。 核移植: 实践证明: 胚胎细胞核移植成功率远高于成体细胞。 思考:胚胎细胞核移植的成功率与体细胞相比如何? P35 7.简述动物细胞核移植的概念和核移植的程序。 克隆羊培育过程 体细胞核移植技术实例 阅读P36 * 第二节 植物的克隆 1.“植物克隆的发展”不作要求。 2.“小资料:植物体细胞杂交”只作为背景资料供阅读,不要求记忆或掌握具体的内容。 说明 1.简述植物细胞全能性的含义。 2.简述植物组织培养的程序。 3.举例说明植物细胞全能性的体现。 4.简述植物细胞培养和器官培养的方法和意义。 5.简述植物原生质体获得的方法及植物细胞工程的概念、操作过程和应用。 6.简述多途径的植物克隆实践。 教学要求 愈伤组织 离体的植物细胞和组织可以通过组织培养技术克隆成完整的植株,那么动物细胞和组织能否也进行同样的克隆? 不能 动物细胞有无全能性? 特点? 随着细胞分化程度的提高而全能性逐渐受到限制,分化潜能变窄。 细胞核仍具有全能性。 动物细胞的全能性受到限制,到现在为止将离体的动物细胞直接克隆成个体还很困难,所以动物细胞和组织不能进行与植物一样的个体克隆。 动物克隆的技术基础是? 为什么要进行动物细胞培养? 动物的细胞和组织培养 P27 第三节 动物的克隆 “小资料:我国科学家在动物组织培养培养方面的贡献”、“小资料:‘多莉’诞生不容易”只作为背景材料供学生阅读,不要求学生记忆或掌握具体的内容。 说明 1.简述动物细胞、组织培养。 2.说出动物组织培养技术的发展历程。 3.描述细胞系及细胞株的含义。 4.简述动物的克隆培养法。 5.描述动物细胞全能性的表现程度,说出动物难以克隆的原因。 6.简述动物的细胞融合技术及应用。 7.简述动物细胞核移植的概念和核移植的程序。 8.列举动物细胞培养与动物细胞核移植的应用和发展前景。 教学要求 将动物体内的一部分组织取出 分散成单个细胞 放在适宜的培养基培养 细胞得以生存并保持生命活动现象 生长、分裂乃至接触抑制和有规律的衰老、死亡等 P28 机械消化或胰酶消化 (1)定义 1.简述动物细胞、组织培养。 取动物胚胎 或幼龄动物器官 和组织 剪碎组织 胰蛋白酶处理 细胞培养 单个细胞 可以使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解,获得单个细胞 P29 思考 1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料? 因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛,分裂能力强 3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞? 动物细胞分裂生长到互相接触时,细胞就会停止分裂增殖,出现接触抑制。 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质 动物细胞培养:体外培养分散后的单个细胞,使其得以生存,并保持生命活动现象。像体内一样呈现一定的组织特性。 动物组织培养:体外培养动物组织,使其维持生活状态或生长特性。可以伴随组织分化,但最终成为细胞培养。 动物器官培养:体外培养动物器官原基、部分或整个器官,使之得以保存、生长。保持器官的结构、功能及分化能力。 组织培养 P28 真正开始 1885年鸡神经板在生理盐水中培养成活组织培养一词诞生 1903年 皮肤及白细胞培养与腹水和血清中,结果细胞的成活期达1个月,并且看到细胞分裂 1907美国科学家将一部分蛙胚神经管培养在蛙淋巴液中,成功看到了神经纤维末端的阿米巴运动,解决了神经纤维起源问题,并创立了悬浮培养法 萌芽 P28—29 2.说出动物组织培养技术的发展历程。 1951通过对黑人妇女的宫颈癌组织的体外连续培养,获得肿瘤细胞系即不死细胞系-海拉细胞系 1943科学家在致癌物20-甲基胆蒽的诱导下培养小鼠结缔组织,获得了能在小鼠体内生长肉瘤的L-细胞系 组织培养工作进入了全新阶段 3.描述细胞系及细胞株的含义。 (2)适宜的环境条件 无菌、无毒环境:加抗生素,定期更换培养液 适宜的温度和pH值:温度:36.5±0.5 ℃ pH值:7.2-7.4 适宜的气体环境:O2和CO2(95%空气和5%CO2) 适宜的渗透压等
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