药学第14章DNA的复制与修复课件.pptVIP

复制 逆转录 DNA的损伤修复 复制的方式 ——半保留复制(semi-conservative replication) 双向复制(bidirectional replication) 半不连续复制(semi-discontinuous replication) 1、半保留复制的实验依据和意义 DNA生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板(template)按碱基配对规律，合成与模板互补的子链。子代细胞的DNA，一股单链从亲代完整地接受过来，另一股单链则完全从新合成。两个子细胞的DNA都和亲代DNA碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制。 2、双向复制 原核生物复制时，DNA从起始点(origin)向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子的复制。 习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子(replicon) 。复制子是独立完成复制的功能单位。 聚合反应的特点 DNA 新链生成需引物和模板； 新链的延长只可沿5? → 3?方向进行 。 2、DNA聚合酶 全称：依赖DNA的DNA聚合酶 (DNA-dependent DNA polymerase) 简称：DNA-pol ①DNA-pol的核酸外切酶活性和及时校读 ②复制的保真性和碱基选择 DNA聚合酶靠其大分子结构协调非共价（氢键）与共价（磷酸二酯键）键的有序形成。 嘌呤的化学结构能形成顺式和反式构型，与相应的嘧啶形成氢键配对，嘌呤应处于反式构型。 ? 细胞能否分裂，决定于进入S期及M期这两个关键点。G1→S及G2→M的调节，与蛋白激酶活性有关。 ? 蛋白激酶通过磷酸化激活或抑制各种复制因子而实施调控作用。 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不是同步起动。 复制的起始需要DNA-polα（引物酶活性）和polδ（解螺旋酶活性）参与。还需拓扑酶和复制因子(replication factor, RF)。 增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen, PCNA)在复制起始和延长中起关键作用。 逆转录的概念 以RNA为模板，以dNTP为原料，在逆转录酶作用下，合成DNA的过程称为逆转录（ Reverse Transcription ） 第三节 突变、单核苷酸多态性与个体差异 一、突变（见前节） 二、单核苷酸多态性与个体差异 端粒酶的催化延长作用 爬行模型 DNA聚合酶复制子链 进一步加工 滚环复制(rolling circle replication) 3、滚环复制和D环复制 是某些低等生物的复制形式，如?X174和M13噬菌体等。 3?-OH 5?-P 5? 5? 5? 3? 3? 3? 3? 5 滚环复制 5 ?? 5? 3? 3? 5? dNTP DNA-pol γ D环复制(D-loop replication) 是线粒体DNA (mitochondrial DNA，mtDNA)的复制形式。 复制 逆转录 DNA的损伤修复 DNA的生物合成方式 逆转录酶 逆转录酶(reverse transcriptase) RDDP 模板：RNA 原料：dNTP 引物：tRNA 产物：cDNA 1、逆转录的物质基础 2、逆转录病毒细胞内的逆转录过程 RNA 模板 逆转录酶（RDDP) DNA-RNA 杂化双链 逆转录酶(RNA酶，Rnase) 单链DNA 逆转录酶(DDDP) 双链DNA （cDNA) 解螺旋酶(helicase) ——利用ATP供能，作用于氢键，使DNA双链解开成为两条单链 引物酶(primase) ——复制起始时催化生成RNA引物的酶 单链DNA结合蛋白(single stranded DNA binding protein, SSB) ——在复制中维持模板处于单链状态并保护单链的完整 10 8 局部解链后 DNA拓扑异构酶(DNA topoisomerase) 解链过程中正超螺旋的形成 拓扑异构酶作用特点 既能水解 、又能连接磷酸二酯键 拓扑异构酶Ⅰ 拓扑异构酶Ⅱ 分 类 拓扑异构酶Ⅰ 切断DNA双链中一股链，使DNA解链旋转不致打结；适当时候封闭切口，DNA变为松弛状态。 反应不需ATP。 拓扑异构酶Ⅱ 切断DNA分子两股链，断端通过切口旋转使超螺旋松弛。 利用ATP供能，连接断端， DNA分子进入负超螺旋状态。 作用机制 5、DNA连接酶 连接DNA链3?-OH末端和相邻DNA链5?-P末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连接成一条完整