2014-12-3分子遗传学讲解.ppt

pi RNA 张泽鹏 陈美秀 武云娥 遗传学 2014-12-3 piRNA的发现 2006年，在哺乳动物睾丸组织中发现了一种特异表达的内源性小分子RNA,分子大小集中在 26-31 nt, 同 Argonaute 家族的Piwi亚家族蛋白质相互结合,因此被命名为 piwi-interacting RNA,简称piRNA,初步确定具有基因沉默调控和维持种系DNA稳定的功能. During a search for candidate mammalian factors for TGS, we purified a complex that contains small RNAs and Riwi, the rat homolog to human Piwi. RNA指导的基因沉默： 1.转录水平-transcriptional gene silencing（TGS）：通过改变染色体构象抑制基因表达。 2.转录后水平-（Posttranscriptional gene silencing)： 通过mRNA的减稳作用和抑制mRNA的翻译实现。 Ago蛋白家族 Argonaute protein family 首次在果蝇(Drosophila)中发现，起着调节生殖干细胞维持的作用。 Two clade: 一 piRNA 的发现 一 piRNA 的发现 We designate RNAs found with rat Piwi to be Piwi-interacting RNAs (piRNAs) and the complex to be the piRNA complex (piRC). by Nelson C. Lau,Anita G. Seto,Jinkuk Kim,Satomi Kuramochi-Miyagawa,Toru Nakano, David P. Bartel,Robert E. Kingston? (2006 nature) 什么是piRNA? piRNA（Piwi-interactingRNA)： 一类小型非编码RNA分子，长度为26～31nt，大部分集中在29～30nt。表现在哺乳动物的睾丸中（后来发现卵巢中也有），与Piwi蛋白结合形成piRNA复合物（piRNA complexes，piRCs）才能发挥它的调控作用。 piRNA结构特征 单链小RNA，长度为26～31nt，大部分集中在29～30nt；5端富含尿嘧啶核苷酸。 piＲNA 的基因在染色体上分布极不均匀，其主要存在于基因间隔区，而很少存在于基因区和基因序列区 必须与特定的 PIWI 蛋白质相结合才能发挥功能 成熟piRNA 3’端的2’氧是被甲基化修饰的，增加了piRNA的稳定性 associated with piRNA功能 各种基因沉默机制的核心是 Argonaute 蛋白 , 它直接和小RNA结合并以这些小RNA作为识别和剪接目标片段的向导。 两类的共同点是都含有 2 个重要的结构域, PAZ ( Piwi, Argonaute, Zwille) 结构域和具潜在RNase H 核酸内切酶活性的 Piwi 结构域。Piwi基因突变影响生殖系发展。 Ago蛋白家族 Argonaute protein family Two clade: piRNA 在睾丸中无论是在数量上还是在种类上都 大量表达。最初的研究发现, 所有涉及 piRNA 途径 的突变都显著导致反转录转座子的过量表达, 其结 合蛋白 Piwi 的突变使雄性动物体无法产生成熟精 子而不育。 在哺乳动物中，Piwi亚家族的3种蛋白成员M IWI、MILI 和 M IWI2 主要局限于生殖细胞中表达,M ILI、MIWI在精子发生过程的不同阶段先后表达,三者的突变会引起精子发生出现显著缺陷，致使雄性不育。 在果蝇中，Piwi亚家族蛋白成员有 Piwi、Aubergine( Aub) 和 Ago3。 Piwi突变引起不育和生殖干细胞的丢失，aub 对生殖细胞系产生有正常功能的卵母细胞是必需的。 大多数piRNA作用途径的异常通过激活Chk-2作 用通路引起果蝇轴线发育特异性的缺陷。 在小鼠卵巢里的 piRNA和siRNA均抑制反转录转座子,两条途径选择各自的靶目标。 Miwi，Miwi2和Mil