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最佳实践规范及标准操作流程文件汇编 V2.01 上海生物样本库 最佳实践规范及标准操作流程 文件汇编 （第二版） 2010年5月 最佳实践规范及标准操作流程文件汇编 V2.01 上海生物样本库 质量管理体系文件 文件名称 分光光度法RNA检测操作规程 编号 SOP-TQ-011-01 批 准 人 批准日期 实施日期 分光光度法 RNA 检测操作规程 1.目的 规定了分光光度法RNA检测的操作。 2.适用范围 适用于从人体体液、细胞、组织等样本中提取和纯化的RNA样本的使用分光 光度法的检测。 3.定义和术语 3.1 核糖核酸 ribonucleic acid，RNA 由脱氧核糖核酸（DNA）为模板转录合成的核糖核酸的片断。 4.职责 4.1 样本库实验人员负责分光光度法的RNA检测工作。 5.设备和器材 5.1 1xTE缓冲液 1M Tris.Cl, pH 7.4, 10ml； 0.5M EDTA, pH 8.0, 2ml； 加入DEPC水并定容至1L。 6.正文 6.1 检测原理 6.1.1评价RNA质量的标准是RNA的均一性和完整性。均一性的RNA取决于 有效的去除RNA提取物中的DNA、蛋白质和其他杂质；完整的RNA取决于最大限 度地避免纯化过程中内源性及外源性RNase对RNA的降解。通常采用紫光分光光 度法测定RNA地浓度和纯度，DNA或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强 1 最佳实践规范及标准操作流程文件汇编 V2.01 吸收，其吸收峰在260nm处。波长为260nm时，DNA或RNA的光密度OD260不仅 与总含量有关，也随构型而有差异。该方法不能区别 DNA 和 RNA 的含量。纯的 RNA A260/A280＝2.0，但由于所用标本不同，此比值有一定的变化，一般在1.7～ 2.0之间。低于1.7说明有蛋白和酚污染，需进一步酚/氯仿抽提。高于2.0，可 能是异硫氰酸残存。 6.2 检测步骤 6.2.1紫外分光光度计开机预热10min。 6.2.2用1xTE缓冲液在分光光度计下进行校零。 6.2.3用1xTE缓冲液稀释RNA样品，调整分光光度计下A260的读数在0.1~1 的范围内。 稀释比例 1:10 1:50 1:100 RNA(ul) 1 1 1 1xTE缓冲液(ul) 9 49 99 6.2.4使用分光光度计测定A260和A280下的值。 6.2.5 RNA浓度计算 RNA (ug/ul) = A260 x 0.04 x 稀释比例 （1 A260 = 40 ug/ml, 1:100 稀 释） 6.2.6 RNA纯度 （A260/A280）应该在1.7~2.0之间。 7.相关文件 无 8.参考标准与文献 分子克隆实验指南 第三版 ABN Biorepository Protocols, Mar 2007 2