HPLC+法分析固相合成胸腺五肽中的五种保护氨基酸.pdfVIP

M018 HPLC 法分析固相合成胸腺五肽中的五种保护氨基酸 林敏 屠春燕 陆溢 (南京工业大学 制药与生命科学学院，江苏 南京 210009) 摘 要 采用反相高效液相色谱（HPLC ）分离固相合成胸腺五肽中的五种 9-芴甲氧羰基（FMOC ）保护 氨 基 酸 ： Fmoc-Arg(Pbf)-OH 、 Fmoc-Asp(OtBu)-OH 、 Fmoc-Lys(Boc)-OH 、 Fmoc-Val-OH 、 Fmoc-Tyr(OtBu)-OH ，检测波长 264nm, 流动相为 20mmolL-1 的乙酸钠溶液。方法的精密度分别为 RSDArg=0.7414, RSDAsp=1.064, RSDLys=0.9880, RSDVal=0.6568 ， RSDTyr=0.8354 。 关键词 高效液相色谱 FMOC 保护氨基酸 DETERMINATION OF FIVE FMOC PROTECTED AMINO ACIDS OF THE MATERIAL OF TP-5 BY HPLC LIN Min, TU Chunyan and LU Yi (College of Life Science and Pharmacy, Nanjing University of Technology, Nanjing 210009, China) Abstract Five Fmoc protected amino acids of the materials of the solid-phase synthesis of TP-5 were separated by reversed phase high performance liquid chromatography at the same time. The five Fmoc protected amino acids are Fmoc-Arg(Pbf)-OH 、 Fmoc-Asp(OtBu)-OH 、 Fmoc-Lys(Boc)-OH 、Fmoc-Val-OH 、 Fmoc-Tyr(OtBu)-OH. They can be detected at 264 nm by UV -1 detector with 100% Acetonitrile and 20mmolL CH COONa solutions(use the CH COOH to 3 3 -1 adjust the pH=4)as the mobile phase , A:B=50:50; Flow-Rate=1ml·L . The accuracy of the method is as follows: RSDArg=0.7414, RSDAsp=1.064, RSDLys=0.9880, RSDVal=0.6568 ， RSDTyr=0.8354 。 Key words HPLC, Fmoc protected amino acid 引 言 自从R.B.Merrifield[1]发明固相合成多肽以来，有关活性多肽及蛋白质的化学合成研究发展 迅速，但要获得高纯度的目标肽相对困难，因此控制合成原料—保护氨基酸的纯度对于目标 肽的纯度具有重要意义。 人工合成的胸腺五肽与胸腺生成素（Thymopoietin,TP ）的32-36 位氨基酸残基顺序相同， 即NH2-Arg-Asp-Lys-Val-Tyr-OH,简称 TP-5[2] 。在 FMOC 策略合成胸腺五肽中所用到的氨基酸组 分的α-氨基和侧链功能基团均是经过保护基严格保护的，与用氯甲酸-9-芴基甲酯 （FMOC-Cl） 为柱前衍生化对氨基酸衍生得到的 FMOC 氨基酸[3][4]结构上有区别。在氨基酸经过衍生得到的 FMOC 氨基酸中，直链氨基酸经过衍生得到的 FMOC 氨基酸与多肽