KAP71基因在内蒙古白绒山羊皮肤中的表达.pdfVIP

76 中国草食动物 2006年 使卵泡由非促性腺激素依赖性向依赖性转变，而后一个高峰是 胞上也存在。脑垂体前叶分泌的FSH也就优先作用于颗粒层 促进卵泡迅速成熟、发育。F2和F3阶段则是卵泡正处于被优细胞而发挥作用，促进卵泡颗粒细胞产生E2和P．进而维持卵 势化卵泡所抑制阶段，因而FSHR表达少。一旦这种抑制被解泡的生长发育。 除．则FSHR迅速表达，使FSH也迅速发挥作用，促进卵泡的迅 4小结 速发育。 4．1 辽宁绒山羊和本地山羊相同发育阶段卵泡FSHR基因表 3．3辽宁绒山羊卵泡颗粒细胞和膜细胞FSHR基因达水平没有明显差异，随着卵泡发育，其表达水平的变化趋势也 的表达 相一致。 目前有关山羊卵泡颗粒细胞和膜细胞FSHR基因表达的研 究尚未见到报道。本实验中所有卵泡的颗粒细胞表达水平均高 水平显著高于相应卵泡膜细胞的FSHR基因表达水平。 于膜细胞，说明FSHR基因主要位于卵泡颗粒层细胞上。但膜细 KAV7．1基因在内蒙古白绒山羊皮肤中的表达 张俊霞1，尹俊1，李金泉2，张燕军2，王利2，席海燕1，刘羿羿2，李荣2，刘志红2 (1．内蒙古农业大学生物工程学院，呼和浩特010018；2．内蒙古农业大学动物与医学学院) 摘要：角蛋白关联蛋白是羊绒主要的结构蛋白之一，依据氨基酸的成分，基本上可分为超高硫、高硫和富含甘氨跣／，酪氨酸 册号是AY510121．1。有3个拷贝数。原位杂交显示它在皮肤初级毛囊的皮质层、表皮层和次级毛囊的皮质层有强烈的 表达。 关键词：绒山羊；角蛋白关联蛋白；原位杂交 羊绒是山羊(Caprahi舢)的内层毛被，有很好的纺织性 DNA序列。 能。许多研究结果表明，羊毛的蛋白组成与羊毛纤维的品质有 2．2原位杂交 密切关系。角蛋白(Keratin)及其关联蛋白(KAP)是羊绒主要 将重组质粒经PCR，体外转录制备DIG标记的cRNA探针。 的结构蛋白，它们决定了绒毛的基本特性。根据氨基酸的成分， 石蜡切片9斗m，二甲苯脱蜡，水化，蛋白酶k消化，甘氨酸终止。 KAP7．1属于高甘氨K龛／酪氨酸(HGT)KAP。毛发中高甘氨酸／ 洗脱。50％的去离子甲酰胺预杂交，与DIG标记的cRNA探针 酪氨酸KAP比例的不同是造成毛发性质不同的一个重要原因。 45℃杂交12—16h，洗片，RNaseA消化，与抗体结合4h，然后 在绵羊羊毛中发现了完全缺少高甘氨酸／酪氨酸KAP的有光泽 和碱性磷酸酶反应12h，NBT／BCIP显色，伊红复染，树脂封片， 的突变体就充分证明了这一点。人、小鼠、绵羊等动物的角蛋白 显微镜下观察并照相。 及其关联蛋白已有大量的研究，而山羊的毛发角蛋白及其关联 3结果 蛋白的相关报道很少。本文从成年羊皮肤ESTs中发现了山羊3．1 绒山羊KAP7．1全长cDNA的克隆 KAF7．1，并对其序列及其在皮肤中的表达特征进行了研究．为 筛选出重组克隆进行测序，利用EST(表达序列标签)分析 绒毛结构形成机理的深入研究积累了资料。 并获得山羊KAI7·1mRNA对应的全长cDNA序列，共685bp， 1 材料 在C,eneBank中的注册号是AY510121．1。 选取妊娠55天、75夭、105天、115天，成年3月、4月、5月、 3．2皮肤组织的原位杂交 7月、10月份的阿尔巴斯白绒山羊，从体侧部剪去绒和毛；碘酒 图中蓝紫色为阳性信号。是KAP7—1mRNA表达的部位。红 消毒，酒精脱碘后，用消毒刀片取体侧部皮样，立即投入液氮中 色的是伊红复染的背景。a为内蒙古自绒山羊10月皮肤毛囊 h 保存备用。另取