《高级生物化学 孙梅好》8蛋白质的生物合成-张可伟.pptVIP

基因载体 基因载体的条件；一、能自主复制或随受体细胞染色体ＤＮＡ一起复制。二、易于鉴定和筛选。三、限制酶对其作用的切割点少。四、易引入受体细胞。 质粒--是细菌染色体外的小型环状双链ＤＮＡ。 噬菌体和病毒--噬菌体是感染细菌的病毒。感染有两种方式，一种称为溶源性，另一种称为溶菌性。 Cloning Vector 基因工程的基本步骤 目的基因的获得 外源ＤＮＡ与载体连接 重组ＤＮＡ导入宿主细胞 重组体的筛选 克隆基因的表达、鉴定 基因工程的基本步骤 目的基因的获得 目的基因是指所要研究或应用的基因，或为了某种目的而感兴趣的ＤＮＡ片段。 （一）ＤＮＡ文库 包括基因组文库和cＤＮＡ文库 （二）获取目的基因的方法 １、ＤＮＡ片段直接提取 ２、从基因组文库和cＤＮＡ文库获取 ３、用ＰＣＲ技术扩增目的基因 ４、用化学合成目的基因 外源ＤＮＡ与载体连接 用连接酶将外源ＤＮＡ与载体ＤＮＡ通过共价连接，形成重组体。 重组ＤＮＡ导入宿主细胞 转化：指质粒或其他外源ＤＮＡ导入处于感受态的细菌细胞，并使其获得新的表型的过程。 转导：指感受态细胞捕获和表达噬菌体和病毒ＤＮＡ分子的过程。 转染：是真核细胞主动或被动导入外源ＤＮＡ片段而获得新表型的过程。 质粒连接转化 质粒转化 重组体的筛选 1. 插入失活法 2. 核酸杂交法 3. 免疫测定法 4. ＰＣＲ扩增法 核酸杂交 13.2.5 克