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基因工程教学大纲 genetic engineering 《基因工程》教学大纲 课程名称：基因工程 课程类型：范围选修 学 时：48学时 适用对象：生命类专业 先修课程：《生物化学》、《分子生物学》、《遗传学》、《微生物学》 一、课程性质、目的与任务以及对先修课程要求 基因工程技术是现代生物技术的核心技术，系统学习作为生物工程核心的基因工程可为众多课程的学习打下良好的基础，是生命学科的一门专业选修课。要求学生能较全面和深入理解基因工程原理，并了解生命科学研究的设计思路和基因操作技术平台的应用策略。以求为以后的学习和科研工作打下良好和扎实的理论基础。 本课程涉及到生物学的一些重要课程，如：普通生物学、生物化学、微生物学、遗传学和分子生物学，因此要学生选修这些课程之后，再选修本课程。 教学难点：在讲授基因工程原理的同时，竭力与分子遗传学、细胞生物学、生物化学、分子生物学等赖以发展的学科和相关原理有机地结合起来，开阔学生视野，对生命科学的的基础知识融会贯通，做到理论与应用相结合。 三、与其他课程关系 基因工程是在《生物化学》，《分子生物学》等课程基础上开设的一门专业课；同时为后续的《功能基因组》、《生物芯片》、《生物信息学》打下基础。本课程的学习对全面掌握生物技术各专业基础课的内容具有重要作用，为进一步了解现代生物技术领域的内容具有重要促进作用。 四、教学内容、学时分配及基本要求 第一章 绪论（4学时） 基本要求：掌握基因工程技术的基本概念、基本原理以及基本过程，了解基因工程的发展历史以及研究意义，主要是基因工程的诞生和成熟；掌握基因的现代概念，并理解基因与基因工程之间的关系。 重点：遗传工程、基因工程的概念；基因工程理论上的三大发现和技术上的三大发现；基因工程的基本步骤；基因工程的意义。基因工程的概念；基因工程的基本步骤；基因工程的基本原理。基因工程技术的诞生PCR技术的基本原理 2.2 PCR反应的各种组份及作用 2.3 不对称PCR(Asymmetrical PCR) 2.4 反向PCR（inverse PCR） 2.5 反转录PCR（RT-PCR） 2.6 基因组克隆 2.7 基因的体外诱变 2.8 基因组的比较研究 第三节 核酸分子杂交 ?? 3.1 核酸杂交的基本原理 3.2 常用的杂交膜 3.3 Southern DNA杂交技术 3.4 Northern DNA 吸印杂交技术 3.5 斑点印迹杂交和狭线印迹杂交 3.6 菌落及噬菌体杂交技术 3.7凝胶阻滞实验 3.8 DNaseⅠ足迹实验 3.9硫酸二甲酯（DMS）足迹实验 3.10甲基化干扰实验 3.11体内足迹实验 第四节 DNA的序列分析 4.1 Sanger 双脱氧链终止法 4.2 化学法测序 4.3 杂交测序 4.4 shot-gun测序 第三章 基因工程的酶学基础（6学时） 基本要求：通过本章的学习，熟悉基因工程中所使用的各种工具酶，并能在实际操作中运用它们。 重点知识：同位酶；同裂酶；同尾酶； DNA操作酶的功能及应用（S1核酸酶，DNase I,测序酶，DNA连接酶， Ligase,逆转录酶，碱性磷酸酯酶，甲基化酶）；限制性内切酶的分类、命名原则；电泳后DNA的检测方法；DNA分子量的估算方法；怎样提高平头末端的连接效率；如何实现目的基因与载体连接效率；提高重组率的方法。难点知识：DNA操作酶的功能及应用；怎样提高平头末端的连接效率；如何实现目的基因与载体连接效率；提高重组率的方法。 1.2 限制酶的分离与命名 1.3 限制酶分类 1.4 Ⅱ型酶特征 1.5 限制性内切酶反应条件 1.6 Ⅱ型酶作用机制 1.7 限制性内切酶的应用I核酸酶 第四章 基因工程的载体（8学时） 基本要求：熟悉基因工程中常用的各种载体，了解它们的特点并能在实际操作中运用它们。掌握作为载体的必备条件。了解载体的构建过程和基本方法。 重点：载体；克隆载体；表达载体；穿梭载体；质粒；严谨型质粒松弛型质粒；cos位点；λ cI突变体；溶源/溶菌性噬菌体；粘粒（cosmid）； 噬菌粒；载体的基本要求；质粒的基本特征及其分类；λDNA的特点；M13作为载体的优点；大肠杆菌质粒pBR322、pUC8、pGEM3Z-DNA的特点；不同载体克隆DNA的片段大小；M13、λDNA作为载体需要进行哪些改造？λ克隆载体的类型YAC载体包括那些结构，来源和构建方法。 难点：严谨型质粒松弛型质粒；粘粒（cosmid）；噬菌粒；M13、λDNA作为载体需要进行哪些改造？λ克隆载体的类型； YAC载体包括那些结构，来源和构建方法λ噬菌体载体 2.1 λ-phage的分子生物学 2.2 λ-phage载体的构建 第三节 单链DNA噬菌体载体（M1