活性氧（ROS）检测试剂盒（化学荧光法）.PDFVIP

活活性性氧氧（（RROOSS））检检测测试试剂剂盒盒（（化化学学荧荧光光法法）） 2ml W LA070a 仅用于科学研 究,不能用于诊断 产 品信息 产 品名称 活性氧（ROS）检测试剂盒（化学荧光法） 产 品概述 活性氧检测试剂盒（ React ive Oxygen Species A ssay Kit）是一种利用探针DC FH-DA进行活性氧检测 的试剂盒 。 DC FH-DA本身没有荧光 , 可 以 自由穿过细胞膜 , 进入细胞 内后 , 可 以被细胞 内的酯酶水解生成 DC FH。而DC FH不能 通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞 内。细胞 内的活性氧可以氧化无荧光 的DC FH生成强绿色荧光物DC F， 其荧光在激发波长502nm，发射波长530 nm附近有最大波峰，强度与细胞 内活性氧水平成正 比。 本试剂盒本底低，灵敏度高，线性范 围宽，使用方便；可以测定100-500个样 品。 包装信息 试剂名称 W LA070a 保存条件 DC FH-DA（1mM）in DMSO 1ml -20℃ , 避光 活性氧供氢体（12mM） 1ml -20℃ , 避光 注意事项 1. 探针装载后 , 一定要洗净残余 的未进入细胞 内的探针 , 否则会导致背景较高 。 2. 尽量缩短探针装载后测定所用的时间（刺激 时间除外）， 以减少各种可能的误差 。 3. 血清或培养基颜色并不影 响DC FH-DA及细胞 内荧光产生，但可能影 响荧光显微镜观察 。 4 . 阳性对照为活性氧供氢体 。 5. 整个实验应该避光操作，检测 时应用不透光 的96孔板 。 操作流程 装载探针 对于药物处理 时间较短（＜2h）的细胞或预计ROS效应较弱，可先或 同时装载DC FH-DA探针 。反之，对于细胞药物 处理 时间较长（＞6h）的细胞或预计产生ROS效应较强 , 可后装载探针DC FH-DA。 1 . 培养细胞 的测定： （ 1）加入荧光探针 ①、在 暗室 中加入 D C FH-DA 于培养基，推荐初始工作浓度为 1 0 μM。对不 同的细胞或处理，DC FH-DA 工作浓度 可为 1 00 n M-20 μM，需要进行预实验确定合适 的浓度，总体稀释倍数应在1:500-1:1000以上，避免DMSO对细胞 的影 响。 ②、37℃孵育细胞30 min-几小时，通 常为30 min-60 min。 ③、细胞收集： 悬浮细胞：1000g离心5-10 min收集细胞，用PBS洗涤1-2次，离心收集细胞沉淀物用于荧光检测 。 贴壁细胞：用胰酶消化细胞（0.25%胰酶消化2-3min），加入培养基终止消化，制成细胞悬浮，1000g离心5- 10 min收集细胞，用PBS洗涤1-2次，离心收集细胞沉淀物用于荧光检测 。 （2）荧光检测 ①、将收集好的细胞用PBS进行重悬，并检测 。 ②、波长设置：最佳激发波长为500、4 85（ 500 ±15nm），最佳发射波长525（ 530 ±20 nm）。 2 . 组织样本 的测定：（可用于荧光酶标仪以及荧光分光光度计法测定） （1）样本前处理： 称取组织重量，按照重量（g）：体积（ml） =1： 20的比例加入匀浆介质（100 mM磷酸缓冲液）进行匀浆，之后 1000g离心10 min，取上清液待测，取部分上清液用于蛋 白的测定 。（BCA法蛋 白浓度测定