一株猪支气管败血波氏杆菌的分离与初步鉴定.pdfVIP

ofthe10th of AssociationofAnimaland Science Branch,Chinese ProceedingsSymposiumBiological Veterinary ·病原分离与■‘定· 一株猪支气管败血波氏杆菌的分离与初步鉴定。 吴 金，吴 强，李尊江，胡瑛瑛，柴 华 (哈药集团黑龙江省生物制品一厂， 哈尔滨150069) [摘 要] 从临床上有明显喷嚏、呼吸困难、歪鼻症状的27日龄发病仔猪的鼻腔深部分泌物中分离到一株疑似猪支气管 败血波氏杆菌。经细菌分离培养、细菌形态观察、生化试验和动物感染试验等可初步证明所分离到的细菌为猪支气管败血波 氏杆菌。 [关键词]猪支气管败血波氏杆菌；分离；鉴定 喷嚏、鼻塞、歪鼻等颜面部变形为临床症状的猪的一种呼吸道传染病。主要侵害幼龄猪，3—4周龄或断奶猪 易感，随月龄增加感染率会逐渐降低，成年猪感染后无明显症状，但可感染仔猪，成为本病的带菌者和传播 者。近年来我国部分地区相继有本病发生的报道，笔者从某个体养猪场临床上有打喷嚏、呼吸困难、歪鼻症 状的27日龄发病仔猪鼻腔分泌物中分离到一株疑似猪支气管败血波氏杆菌，经细菌分离培养、形态和培养 特性以及生化试验特性等进行了初步鉴定。现将分离鉴定结果报告如下。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1 试验用培养基 鲜血琼脂培养基、改良麦康凯琼脂培养基、改良马丁琼脂培养基、改良鲍姜氏琼脂培 养基、由本厂生药车间培养基组提供。 1．1．2生化试验用培养基及试剂购自上海化学试剂厂。 1．1．3试验动物体重18—20克小白鼠，由本厂动物室提供。 1．2方法 1．2．1病料采集与处理临床上有明显喷嚏、呼吸困难、歪鼻症状的27日龄发病仔猪放血致死，用灭菌的 棉拭子采取鼻腔深部分泌物，然后将此棉签放入盛有少量PBS容器中保存待用。 1．2．2细菌分离培养将无菌采取的仔猪鼻腔分泌物接种于改良麦康凯琼脂平板培养基上，于37℃潮湿温 箱中培养40小时，分离到微红色菌落，经纯培养后再分别接种于鲜血琼脂平板、改良马丁琼脂平板、改良鲍 姜氏琼脂平板培养基，置37℃潮湿温箱中培养40小时，进行菌落形态观察。 1．2．3细菌形态观察将分离到的细菌经纯培养后，观察菌落形态，同时涂片、革兰氏染色、镜检。 1．2．4细菌生化试验将分离到的细菌纯培养物进行葡萄糖、乳糖、氧化酶、脲酶、硝酸盐还原、柠檬酸盐利 用、过氧化氢酶、谷氨酸脱羧酶、Ⅱ引哚试验、硫化氢试验、V—P试验、七叶苷、甲基红试验。 1．2．5动物感染试验将分离到的细菌纯培养物以pH7．0磷酸盐缓冲液调整制成含活菌数10S／ml的菌液， 接种18—20克小白鼠5只，每只小白鼠腹腔注射菌液0．5ml，观察7天，同时留对照小白鼠5只，每只腹腔注 射pH7．0磷酸盐缓冲液0．5ml，同条件饲养观察。 *作者简介：吴金(1967年～)，男，高级兽医师，在读硕士，从事预防兽医学研究。 ·-——236-——— 中国畜牧兽医学会生物制品学分会第十次学术研讨会论文集 2结果 2．1培养特性在改良麦康凯琼脂平板培养基上生长良好，可见1～1．5mm光滑、圆整、呈微红色的菌落； 在鲜血琼脂平板培养基上可见直径约0．8mm乳白色、光滑致密、|3溶血环的菌落；在改良马丁琼脂平板上可 见透明、光滑、边缘整齐、微隆起的小菌落；在改良鲍姜氏琼脂培养基上可见光滑、乳白色、不透明、边缘整齐、 隆起的小菌落。 2．2形态观察革兰氏染色镜检，为革兰氏阴性菌。镜下视野可见短杆菌或球杆菌。 2．3生化试验结果生化试验结果详见表1和表2。 表1分离菌株的生化试验反应结果(I) 注：+表示阳性或产酸、产气，一表示阴性或不利用、不分解。 2．4动物感染试验结果接种小白鼠于24小时观察时精神沉郁、缩头、闭目、饮食废绝，并于48小时内全 部死亡。 3小结与讨论 3．1从细菌分离试验结果表明，所分离到的细菌在一般的培养基中易于生长，在改良麦康凯琼脂平板、改良 马丁琼脂平板及改良鲍姜氏琼脂平板培养基上培养生长的菌落呈支气管败血波氏杆菌的典型形态；在鲜血 琼脂平板培养基上有p溶血环。可初步说明所分离到的细菌疑为支气管败血波氏杆菌。