实验9细菌的代谢产物概要.ppt

实验九细菌的代谢产物 实验目的要求 1、掌握细菌糖发酵试验、IMViC试验、硫化氢试验、尿素分解试验的原理、结果判断及医学意义； 2、熟悉上述试验的操作方法。 实验主要内容： 一、糖发酵试验 二、IMViC试验 三、硫化氢试验 四、尿素分解试验 五、细菌的色素产生 六、其他 [材料] 1、菌种：大肠杆菌、伤寒沙门菌、痢疾杆菌、变形杆菌培养物；金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌培养物；铜绿假单胞菌培养物； 2、培养基：SS平板、EMB、克氏双糖培养基、生化反应管、普通琼脂平板、血平板； 其他：接种环、接种针、酒精灯、培养箱等。 标本 脓血便、肛拭子 选择/鉴别培基 生化反应 血清学鉴定 克氏双糖铁培养基,动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 玻片凝集试验 SS平板, EMB平板 （一）SS琼脂平板 （1）营养物质：牛肉膏、蛋白胨 （2）抑制剂：胆盐、枸椽酸盐、煌绿等，抑制非致病菌的生长；但胆盐能同时促进病原菌的生长。 （3）鉴别用糖：乳糖 （4）指示剂：中性红 （5）原理：肠道杆菌均能分解葡萄糖产酸，但大多数非致病菌又能分解乳糖产酸产气，而致病菌不分解乳糖。据此，在培养基中加入乳糖和指示剂，制成鉴别培养基。中性红为指示剂，酸性时呈现红色，碱性时呈淡黄色。 一、分离培养 大肠杆菌分解乳糖产酸，通过中性红显色，菌落大而混浊，呈现红色． 志贺氏菌属和沙门氏菌属的细菌不分解乳糖，而分解蛋白质产生碱性物质，菌落形态为光滑微黄透明，园形、中等大小，边缘整齐的菌落。 由于宋内氏痢疾杆菌有分解胆盐中的某些物质和发酵乳糖(产酸)较慢等特点，而使菌落呈淡红或红色的较大或边缘不整齐的扁平菌落。某些沙门氏菌属及变形杆菌因 产生硫化氢，使菌落呈现黑色中心。 组成：无糖培养基＋乳糖＋伊红＋美蓝 底物 指示剂、抑菌剂 原理： 细菌 乳糖 产酸：伊红＋美蓝 紫黑/紫红 结果： 分解乳糖细菌 菌落变黑，有金属光泽 不分解乳糖细菌 菌落无色、半透明（粉色） 分解 （二）伊红美兰（ＥＭＢ）选择培养基 SS或EMB培养基生长现象观察 大肠杆菌 伤寒杆菌 痢疾杆菌 变形杆菌 SS菌落的形态特征 EMB菌落的形态特征 二、生化反应 对 糖 的 分解 对 蛋白质的分解 枸橼酸盐利用试验（C） 尿素酶试验 甲基红试验（M） 吲哚试验（I） 硫化氢试验 糖发酵试验 VP试验（V） 其他试验 （一）单糖发酵试验 原理：细菌具有多种酶系统能分解糖类，产酸产气。不同的细菌对各种糖类的分解不同，因而可以利用糖发酵进行各种细菌(特别是肠道细菌)的鉴别。 大肠杆菌能发酵乳糖产酸；分解葡萄糖产酸产气； 痢疾杆菌、沙门氏菌、变形杆菌则不能乳糖（乳糖除宋内氏迟产酸外均不产酸产气）；分解葡萄糖产酸不产气(仅福氏6型可产少量气)  二、生化反应 葡萄糖发酵试验 中性红指标剂显色范围： 中性环境：红色 酸性环境：黄色 葡萄糖 HCOOH 脱氢酶 CO2+H2 如大肠杆菌、变形杆菌产酸产气 痢疾杆菌、伤寒沙门菌缺少此酶，产酸不产气。 溴甲酚紫指标剂显色范围： 中性环境：紫色 酸性环境：黄色 乳糖发酵试验 中性红指标剂显色范围： 中性环境：红色 酸性环境：黄色 大肠杆菌分解乳糖产酸产气； 痢疾杆菌、伤寒沙门菌、变形杆菌不分解乳糖，不产酸不产气。 溴甲酚紫指标剂显色范围： 中性环境：紫色 酸性环境：黄色 （二） IMViC试验 原理： IMViC试验是一组用于肠杆菌科细菌鉴别的实验，由靛基质试验、甲基红试验、VP试验和枸橼酸盐利用试验组成。 靛基质试验：大肠杆菌阳性；变形杆菌阳性；痢疾杆菌阴性、沙门菌阴性； 甲基红试验：四种肠道杆菌均为阳性； VP试验：除变形杆菌部分菌株阳性外，其余均为阴性； 枸橼酸盐利用试验：大肠杆菌和痢疾杆菌阴性，变形杆菌以阳性为主，伤寒沙门菌阴性，副伤寒沙门菌和其它沙门菌部分阳性。 靛基质试验 阳性 阴性 对照 甲基红试验 甲基红指示剂PH低于4.5，呈红色 甲基红指示剂PH高于5.4，呈黄色 大肠杆菌、变形杆菌阳性； 痢疾杆菌、沙门菌阴性； 四种肠道杆菌VP均为阳性 VP试验 枸橼酸盐利用试验组 溴麝香草酚蓝指示剂酸性呈绿色 碱性呈蓝色；利用枸橼酸盐生成碳酸盐培养基呈碱性反应 四种肠道杆菌VP均为阴性 （三）硫化氢试验 原理：某些细菌能分解培养基中硫氨基酸（如胱胺酸）产生疏化氢、硫化氢与硅酸亚铁中的亚铁离子结合形成黑色的硫化铁， 变形杆菌，伤寒杆菌能产生硫化氢，生成黑色沉淀物； 大肠杆菌、痢疾杆菌不产生硫化氢；硫化氢试验阴性。 （四）尿素试验 原理： 变形杆菌含有尿素酶，经2—4小时培养能分解培养基中较多量尿素产生大量的氨，