实验三血凝试验与血凝抑制试验概要.ppt

实 验 三 血凝价的测定 ( Haemagglutination Assay, HA ) 一、实验目的 了解其实用价值。 操作方法和结果判定方法 掌握血凝的基本原理 1 2 3 二、实验原理 1、血凝试验（heamagglutination assay，HA）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物地红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA）,也称直接血凝反应。 病毒颗粒 红细胞 三、实验材料 1、96孔“U”形或“V”型微量反应板，50uL定量移液器，枪头。 2、生理盐水，1%鸡红细胞悬液。 3、含新城疫病毒的鸡胚尿囊液（血凝效价未知）。 四、实验方法与结果判定 血凝试验（HA) 1、在96微量反应板上的1～12孔内各加入50ul生理盐水。 2、在第1孔内加入50ul病毒液，然后依次倍比稀释至第11孔，最后弃50ul，第12孔为红细胞对照。 3、每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul 4、振荡器振荡均匀，后放于室温或37℃中静置25～ 30分钟 5、结果判定 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 2 × 4 × 8 × 16 × 32 × 64 × 128 × 256 × 512× 1024 × 2048 × 红细胞对照 生理 盐水 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 抗原 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 弃50 红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 结果 ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋ ＋ ＋＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋++ + + － － 血凝效价测定 结果判定标准 1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集； 2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集； 3、 ＋＋ ：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即50％凝集； 4、 ＋ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集； 5、－ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集； 血凝价的判定 以出现++++（100％凝集）的抗原最高稀释倍数为该抗原的血凝价（1:128）。 50ul 1:128稀释的病毒抗原为该抗原的一个血凝单位。 稀释倍数 2 × 4 × 8 × 16 × 32 × 64× 128 × 256 × 512 × 1024 × 2048 × 细胞 对照 结果 ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋ ＋ ＋＋ ＋＋ ＋ ＋ ＋+ ＋+＋+ ＋++ + + — — 五、注意事项 1、红细胞用前请摇匀，否则影响结果判定。 2、用枪加样定要准，尽量不要有气泡 3、避免孔与孔之间引起污染（特别是枪头引起的） 4、结果判定有耐心 5、所有试剂为共用，请勿浪费，勿污染！ 思考题 1、HA试验的原理是什么？ 2、此次实验中抗原的血凝价是多少？