HIV抗体初筛试验.ppt

HIV抗体筛查试验 山西医科大学第二医院检验科 郭先锋 HIV抗体检测的目的和要点 目的 诊断 血液筛查 监测 要点 根据目的选择检测方法及检测策略 ! 严格遵守实验室SOP 筛查试验阳性—需做确证试验 筛查试验阴性—不应做确认试验 筛查及确证试验均应做好咨询工作 HIV抗体筛查试验 试剂 储存温度 效期 样品 血清 血浆 全血 方法 酶联免疫吸附试验（ELISA 化学发光或免疫荧光实验 快速检测(RT)及其它检测试验 明胶颗粒凝集试验 （PA） 免疫渗滤试验 免疫层析试验 免疫胶体金法（硒） 免疫胶体金法 阴性 质控区（C）出现红色反应线 阳性 质控区（C）出现红色反应线 检测区（T）出现红色反应线 无效 质控区 （C）未出现红色反应线 HIV抗体筛查试验 酶联免疫吸附试验（ELISA） 方法类型 双抗原夹心法测抗体 双抗体夹心法测抗原 捕获法测抗体 间接法测抗体 竞争法测抗原\抗体 用于检测HIV抗体的ELISA法 第一代：使用HIV全病毒裂解物为抗原，应用间接法原理检测HIV抗体。如日本富士公司生产的HIV-PA试剂。 第二代：使用在细菌或真菌中表达的人工重组或化学合成多肽HIV抗原，应用间接法原理检测HIV抗体。基因重组通常易于在培养基中生产大量同源性抗原，产品为单一目的基因而非多样性抗原混合，特异性高于第一代试剂。 用于检测HIV抗体的ELISA法 第三代：使用合成多肽HIV抗原（少数用重组抗原），应用双抗原夹心法原理检测HIV抗体。由于标记HIV抗原可同时检测血清中HIV-1 IgG、IgM、 IgA抗体，此类试剂的敏感性和特异性均优于标记抗人免疫球蛋白的间接法。 用于检测HIV抗体的ELISA法 第四代 此类试剂在第三代试剂盒基础上，将针对P24抗原的抗体与HIV-1抗原一起包被固相载体，可同时检测HIV-1 IgG、IgM、 IgA抗体和P24抗原。增加了敏感性和特异性 检测HIV抗体的ELISA试剂 试剂种类 必须使用经国家食品药品监督管理局注册批准，批批检合格的HIV 抗体检测试剂 使用在有效期内且保存条件符合要求的试剂 存放试剂的冰箱温度2-8℃，使用前要放置室温平衡 检测HIV抗体的ELISA试剂 完整的ELISA试剂盒包含以下各组分 已包被抗原或抗体的固相载体 酶标记的抗原或抗体 酶的底物 阴性对照品和阳性对照品 定性测定 标本（和结合物）的稀释液 洗涤液 酶反应终止液 ELISA检测试剂 固相载体 固相载体材质 聚苯乙烯 固相载体形状 微量滴定板 检测HIV抗体的ELISA试剂 结合物（酶标记的抗体或抗原） 辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP) 底物 四甲基联苯胺(TMB) 反应后显蓝色，终止后呈黄色，最适吸收波长为450nm 检测HIV抗体的ELISA试剂 洗涤液 常用含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水 终止液 HRP常用强酸，最常见2mol/L硫酸 ELISA试验 标本的采取和保存 加样 孵育 洗涤 显色与终止 酶标仪测定 标本的采取和保存 避免溶血 红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP 为标记 的ELISA 测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色 避免污染 血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应 保存 一周内 2～8℃ 一周以上 - 20℃ 标本送检 信息