尼康彗星分析系统.doc.doc

彗星分析系统 单细胞凝胶电泳技术已广泛应用于单细胞 DNA 损伤的检测。 实验原理 : 在于损伤的 DNA 在电场中从核内溢出，形成与细胞核“关部”相区别的“尾部”。 目前主要用开头指标、距离指标,强度指标、“矩”类指标等四类指标分析实验 结果。各种因素诱发细胞 DNA 损伤后会影响 DNA 的高级结构，使其超螺旅 松散。这种细胞经过实验中细胞原位裂解、 DNA 解链等过程后，电泳时， 损伤的 DNA 从核中溢出，朝阳极方向泳动，产生一个尾状带，未损伤的 DNA 部分保持球形，二者共同形成“慧星”。在一定范围内，“慧星”的长度（代表 DNA 迁移距离）和经荧光染色后“慧星”荧光强度（代表 DNA 的量）与 DNA 损伤程度相关，这样就可以定量检测单个细胞中的 DNA 损伤 . 单细胞凝胶电泳已成为一种快速、灵敏、简便的检测DNA损伤的方法 样品制作方法 : 取磨砂载玻片，在其毛面铺1.0%正常融点琼脂糖1 ml,室温凝固后刮去;接着铺第一层 0.5％正常融点琼脂糖80 μl,立即加盖玻片(24.00 mm×50.00 mm×0.17 mm )一张, 在4℃温度中凝固5 min；小心取下盖玻片,再铺第二层含待测细胞的低融点琼脂糖75 μl(10 μl细胞悬液与65 μl 0.7％低融点琼脂糖在37℃温度下混合),加盖玻片,在 4℃ 温度下 凝固10 min；取下盖玻片, 在第二层胶上再铺0.7％低融点琼脂糖75 μl 加盖玻片，在 4℃温度下凝固10 min(所有琼脂糖均用无Ca2+、Mg2+的PBS配制,操作 过程中应 尽量避免产生气泡)。去除盖玻片，浸于新鲜配制的冷裂解液(NaCl 14.61 g、Na2-E DTA3.72 g、Tris 0.12 g、肌氨酸钠1.00 g、NaOH 1.30 g，加蒸馏水定 容至89 ml，临用前加Tritonx-100 1 ml，二甲基亚砜10 ml，置4℃温度中备用)中至少1 h 。取出玻片控干，置于水平电泳槽中，玻片间不留空隙，槽内加电泳液(NaOH 42 g、Na2 -EDTA1.302 g，加蒸馏水3 500 ml) 至液面高出玻片0.2 cm,静置20 min,然后在2 5 V电压条件下通过升降电泳液面将电流调至300 mA,电泳20 min。取出玻片,用中性化液(pH 7.5、0.4 mol/L Tris-HCl缓冲液)轻轻滴洗玻片凝胶5次，每次1 min。控干玻片 ，每张加100 μl溴乙锭(2×103 μg/L)染色液，加盖玻片 在4℃温度下染色30 min，最后在荧光显微镜下观察，计数200个细胞. 系统可广泛用于环境毒理学中对DNA具有损伤作用的分析：如紫外光、 电离辐射、氧自由基等因素造成的DNA损伤。以及细胞凋亡，抗癌药物 的药物毒理学研究，遗传毒理研究和肿瘤治疗的跟踪监测等 软件功能 测量参数包括: Head Radius ( 头部半径 ) : 彗星头部半径 Tail Length ( 尾长 ) : 即沿电泳方向“彗星”尾部最远端与头部中心间接的距离；总慧星长度，即“彗星”电泳方向上的最大长度Integral Intensity : 积分光密度 Head DNA% : 头部DNA含量 Tail DNA% : 尾部DNA含量 Tail Moment : 尾部力矩 Olive Moment ( Olive 力矩 ) : 定义为尾部 DNA 占总 DNA 的百分比与头、尾部中心间距的乘积 典型的“ 彗星” 几种 “ 彗星 ” 图