生物传感器-生物探索.ppt

转录过程是将DNA所携带的遗传信息拷贝到短寿命的信使RNA (mRNA)上。步骤如下： 1)DNA被转录部分解螺旋,RNA聚合酶与一条DNA的一条单链结合,该结合部位称为启动子区域(promoter region). 2)RNA聚合酶以所结合的DNA链为模板,合成延伸一段序列互补的RNA链. 3)完全合成的RNA脱离RNA聚合酶/ DNA复合物,并进入细胞质开始参与翻译. 2) RNA功能 RNA有信使RNA(mRNA)、转移RNA(tRNA)、核糖体RNA(rRNA)三类，以及新近发现的小分子核内RNA(snRNA).分别有自己的功能。 mRNA将DNA所含有的信息转录下来并来到蛋白质翻译机器(核糖体),在此它将直接指导蛋白质的合成. rRNA是蛋白质合成机器—核糖体结构的一部分.真核生物含有4种rRNA,在蛋白质合成中有几种作用:28s rRNA具有催化作用,它构成核糖体60s亚基胎基转移酶活性; 18s rRNA通过识别作用,校正mRNA和肽基化rRNA的位置; rRNA的三维空间结构形成装配整个核糖体的骨架. tRNA直接将mRNA所转录的DNA信息解码成蛋白质的氨基酸序列. 2.6催化抗体( catalytic antibody) 催化抗体也称抗体酶(abzymes),是抗体(antibody)和酶(enzyme)的复合词,是具有催化活性的单克隆抗体.它通常是人工合成物,但也存在于正常人体内和病患者体内. 2.7催化性核酸 2.7.1 催化性RNA 类型与结构 催化性RNA具有较 弱的裂解和连接酶 活性,其催化具有 RNA序列选择性 顺式剪切(cis-cleaving) 反式剪切(trans-cleaving). 超二级结构(motif) 锤头RNA(hammerhead RNA) 发夹RNA(hairpin RNA) 组I内含子(group I intron) 组II内含子(group II intron) RNA酶P中的RNA组分 肝炎-?-RNA 都能切断磷酸二酯键 2.7.2催化性DNA(catalytic DNA) 催化性RNA的主要缺点是比较脆弱,容易受核酸酶的攻击而水解.如在双螺旋形成超二级结构域和催化域的某些特殊部位用DNA取代后能改善生物学稳定性. 为了获得能够剪切RNA的DNA序列,一般用体外筛选方法. 无天然存在的催化性DNA,人工合成的催化性DNA是潜在的生物传感器的分子识别元件. 2.8生物学反应中的物理量变化 1)生物反应的热力学：自发反应总伴随着自由能(free energy)的降低,生物学反应过程都伴随热力学变化:分子相转换、分子间相互作用、酶催化反应、微生物细胞反应。 2)生物发光(bioluminescence):是由于某些生物体内一些特殊物质(如荧光素)的氧化而产生的现象. 3)颜色反应和光吸收:生物反应中的颜色变化包括生物体内产生色素和生物体或酶与底物作用后产生颜色物质两个方面. 4)阻抗变化:微生物反应可使培养基中的电惰性物质代谢为电活性产物.当微生物生长和代谢旺盛时,培养基中生成的电活性分子和离子增多,使培养液的导电性增大,阻抗降低;反之,则阻抗升高. 催化常数Kcat(catalytic constant)是酶动力学的第二个重要常数,用来直接描述酶分子活力:在最适合的底物浓度下,每摩尔酶每分钟将底物浓度转变为产物的底物的摩尔数(或有关基因的当量数). Kcat越大,在酶分子表面的催化事件发生越快,即催化效率高. Kcat的单位是s-1,因此, Kcat的倒数可以被看作是时间(s),即一个酶分子转换一个底物分子所需要的时间,故Kcat有时被称为转化数(turnover number). 影响酶促反应的因素 影响酶促反应的因素很多，除了酶和底物的性质，还有酶的抑制剂、温度、pH值、酶的活性和底物浓度等。 1)抑制剂 永久性(不可逆):不可逆抑制剂的结合位点通常与底物的结合位点不同，它是通过分解酶与底物的复合物来抑制反应物的生成，因此这种抑制不能通过加过量的底物来消除。可用化学方法除去抑制剂，使酶复活。 暂时性(可逆)：是抑制剂和酶很快达成平衡。由于酶和抑制剂的结合是可逆的，所以可逆抑制剂可以被大浓度的正常底物所取代。 2)温度 温度主要影响酶的稳定性。它导致酶的构象变化而影响酶和底物的结合，而降低酶促反应的最大反应速度。通常在4℃下保存。 3)pH pH对酶促反应的