流式细胞仪-12.16题材.ppt

细胞凋亡研究 细胞发生凋亡时，其细胞膜的通透性也增加，但是其程度介于正常细胞与坏死细胞之间。利用这一特点，被检测细胞悬液用荧光素染色，利用流式细胞仪测量细胞悬液中细胞荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。 主要介绍：PI单染色法和PI-Annexin V双染法 PI单染色法 原理：凋亡晚期，DNA发生断裂，形成小分DNA片段，渗透到细胞膜外。用PI （Propidium iodide碘化丙啶），染色，因为PI特异性结合于细胞DNA，检测DNA 含量的变化，根据这个原理，可测出凋亡细胞的含量。 图中2N代表G0/G1期细胞，4N代表G2/M期细胞，两者中间代表S期细胞。这是以2倍体和4倍体细胞为主的流式DNA图 在G0/G1峰前出现一个亚二倍体峰，即凋亡峰。 由于细胞凋亡以后， DNA裂解成小片段后， PI染色量相应减少，形成亚二倍体峰。 PI-Annexin V双染法 原理：在细胞凋亡早期位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸（PS)迁移至细胞膜外测； 磷脂结合蛋白V（Annexin V）是一种钙依赖性的磷脂结合蛋白，与PS具有高度的结合力； 将Annexin V标记上荧光素（如异硫氰酸荧光素FITC），同时结合使用PI染法进行凋亡细胞染色。 结果判断 正常活细Annexin V 、PI均低染 早期凋亡细胞Annexin V高染、PI低染 晚期凋亡细胞Annexin V、PI均高染 坏死细胞Annexin V低染、 PI均高染 文献资料 [1] 谢小梅, 许杨. 流式细胞术[J]. 中国生物工程杂志, 2003, 23(9):100- 104. [2] 赵泓, 刘凡. 流式细胞仪[J]. 安徽农业学报,2006, 12(12):39-41. [3] 杨蕊, 邹明强. 流式细胞术的最新进展[J]. 分析测试学报 , 2004, 23(6): 124-128. [4] 贾永蕊 流式细胞术 [M]. 北京: 化学工业出版社, 2009:3-30. * There are different types of filters in the optics system. Here’s a brief description of three of the filter types. A longpass (LP) filter has the ability to allow wavelengths equal to or longer than the rated value to pass through the filter while wavelengths shorter than the specified wavelength are reflected off. A shortpass (SP) filter is similar to a longpass but will pass shorter wavelengths and reflect longer wavelengths. A bandpass (BP) filter combines the properties of both filters, giving you the ability to select a given bandwidth to be delivered to the detector. This example 500/50, will pass wavelengths of 500 +/- 25. * *   流式细胞仪简介 逄亚楠 2013年12月17日 流式细胞仪 流式细胞仪（Flow Cytometry, 简称FCM）是对高速直线流动的细胞或生物微粒进行快速定量测定和分析的仪器,主要包括样品的液流技术、细胞的计数和分选技术,计算机对数据的采集和分析技术等。 流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一项快速检测分析单个粒子多物理特性的高技术，通常指细胞通过激光束时在液流中的特性，即粒子的大小，密度或是内部结构，以及相对的荧光强度。通过光电系统记录细胞的散射光信号和荧光信号可得知细胞特性。 研究对象为生物颗粒，如各种细胞、染色体、微生物、及人工合成微球等。 流式细胞仪的发展简史 雏形诞生于1934年,Moldavan提出最早的流式细胞仪使悬浮的单个血红细胞流过玻璃毛细管,在亮视野下用显微镜进行计数,并用光电记录装置测量的设想。 1953年Crosland -Taylor根据牛顿流体在圆形管中流动规律设计了流动室。其后经过不断改进,设计了光电检测设备和