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液体培养基接种法(操作).ppt
二,斜面培养基接种法(操作) 斜面接种时的无菌操作 (1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞 实验步骤(斜面接种法) 用左手握住菌种管(葡萄球菌或大肠杆菌)和斜面培养基管,右手持接种环。 用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞,将管口通过火焰灭菌。 用接种环或接种针伸入菌种管内,挑取用来接种的菌苔。 伸入斜面培养管内,先从斜面底部到顶端拖一条接种线,再自下而上蜿蜒划线。 接种完成之后,用火焰灭菌培养管口,并塞上棉塞,置于37℃培养。 三,半固体培养基接种法/ 穿刺接种法(操作) 穿刺接种法 实验步骤(穿刺接种法) 用左手握住菌种管(大肠杆菌或痢疾杆菌)和半固体培养管,右手持接种针。 用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞,将管口通过火焰灭菌几次。 用接种针伸入菌种管内,挑取用来接种的菌苔。 垂直刺入半固体中心,至近管底部,然后沿穿刺线退出。 塞回棉塞,接种针重新灭菌。接种完毕,于37℃培养18—24h,观察生长情况。 四,液体培养基接种法(操作) 实验步骤(液体培养基接种法) 用灭菌接种环挑取用来接种的菌苔。 菌种管:葡萄球菌/大肠埃希菌/痢疾杆菌 在试管内壁与液面交界处轻轻研磨,使细菌均匀得散落在液体培养基中。 五,细菌在液体、固体、半固体培养基中的生长现象(示教) 固体培养基上的菌苔和菌落 半固体培养基 示教样本: 大肠杆菌 痢疾杆菌 液体培养基 菌膜 菌沉淀 均匀浑浊 对照 显教样本: 大肠杆菌 枯草杆菌 乙型链球菌 实验室规则 接触到病原菌,一定要坚持无菌操作 进实验室穿上白大衣,离开时反折 严禁饮食,也不要以手抚摸头、面等部位 若发生吸入菌液,割破手指等事故,必须报告老师 接触过菌液的吸管、玻片等器材,投入含有2~3%来苏儿的容器内 实验完毕,整理桌面 微生物实验要求 做实验后要认真完成实验报告,所得结果必须真实记录 浙江大学实验报告 课程名称: 实验类型: 实验项目名称: 学生姓名: 专业: 学号: 同组学生姓名: 指导老师: 实验地点: 实验日期: 年 月 日 实验目的和要求(必填) 实验内容和原理(必填) 主要仪器设备 操作方法与实验步骤 实验数据记录和处理 实验结果与分析(必填) 讨论、心得 实验一革兰氏染色、细菌接种 实验内容 一,革兰氏染色(操作) 二,细菌接种 平板划线法(操作) 斜面培养基接种法(操作) 半固体培养基接种法/穿刺接种法(操作) 液体培养基接种法(操作) 细菌在液体、固体、半固体培养基中的生长现象(示教) 显微镜的使用和保护 --- 原理 油镜与其他物镜的不同是载玻片与物镜之间不是隔一层空气,而是隔一层油质称为油浸系。这种油常选用香柏油 如果玻片与物镜之间的介质为空气,称为干燥系,当光线通过载玻片后,受折射发生散射现象,进入物镜的光线显然减少,这就降低了视野的照明度 香柏油的折射率n=1.515,与玻璃n=1.52相近。当光线通过载玻片后,可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射 油浸没物镜 介质:空气;香柏油 油镜的识别 油镜的镜筒最长,透镜直径最小,上面刻有90倍或100倍或Oil等 油镜的使用 先按低倍镜到高倍镜的操作步骤找到物像,并将观察部分移至视野的中央。 转动旋转盘,使高倍镜移向一侧,在盖玻片上滴一滴香柏油,然后将油镜对准通光孔,使油镜下端与香柏油接触(注意操作动作要慢,以免压碎玻片或损坏镜头)。 从目镜内观察,微微上下转动细调节器,至视野内出现清晰的物像时为止。 油镜使用完毕后,必须用拭镜纸沾少许二甲苯将油镜上的香柏油擦净,并用干的拭镜纸檫去二甲苯。 显微镜用毕后,升高镜简,取下玻片标本,转动旋转盘,使每个物镜都不对准通光孔,再下降镜筒,使物镜接近载物台,将聚光镜降下,最后放回橱内。 革兰染色法 由丹麦C.Gram于1884年创立,是细菌学中很重要的鉴别染色法,通过此法染色,可将细菌鉴别为革兰阳性菌(G+)和革兰阴性菌(G-)两大类 细菌细胞壁的结构 革兰染色法--原理 G+菌胞壁结构致密,肽聚糖层厚,脂质含量少,乙醇不易透入。同时乙醇使细胞壁脱水形成一道屏障,阻止结晶紫—碘复合物从胞内渗出,故细菌仍保留初染
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