液体培养基接种法（操作）.ppt

二，斜面培养基接种法（操作） 斜面接种时的无菌操作 (1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞 实验步骤（斜面接种法） 用左手握住菌种管（葡萄球菌或大肠杆菌）和斜面培养基管，右手持接种环。 用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞，将管口通过火焰灭菌。 用接种环或接种针伸入菌种管内，挑取用来接种的菌苔。 伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒划线。 接种完成之后，用火焰灭菌培养管口，并塞上棉塞，置于37℃培养。 三，半固体培养基接种法/ 穿刺接种法（操作） 穿刺接种法 实验步骤（穿刺接种法） 用左手握住菌种管（大肠杆菌或痢疾杆菌）和半固体培养管，右手持接种针。 用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞，将管口通过火焰灭菌几次。 用接种针伸入菌种管内，挑取用来接种的菌苔。 垂直刺入半固体中心，至近管底部，然后沿穿刺线退出。 塞回棉塞，接种针重新灭菌。接种完毕，于37℃培养18—24h，观察生长情况。 四，液体培养基接种法（操作） 实验步骤（液体培养基接种法） 用灭菌接种环挑取用来接种的菌苔。 菌种管：葡萄球菌/大肠埃希菌/痢疾杆菌 在试管内壁与液面交界处轻轻研磨，使细菌均匀得散落在液体培养基中。 五，细菌在液体、固体、半固体培养基中的生长现象（示教） 固体培养基上的菌苔和菌落 半固体培养基 示教样本： 大肠杆菌 痢疾杆菌 液体培养基 菌膜 菌沉淀 均匀浑浊 对照 显教样本： 大肠杆菌 枯草杆菌 乙型链球菌 实验室规则 接触到病原菌，一定要坚持无菌操作 进实验室穿上白大衣，离开时反折 严禁饮食，也不要以手抚摸头、面等部位 若发生吸入菌液，割破手指等事故，必须报告老师 接触过菌液的吸管、玻片等器材，投入含有2~3%来苏儿的容器内 实验完毕，整理桌面 微生物实验要求 做实验后要认真完成实验报告，所得结果必须真实记录 浙江大学实验报告 课程名称： 实验类型： 实验项目名称： 学生姓名： 专业： 学号： 　　　　 同组学生姓名： 指导老师： 实验地点： 实验日期： 年 月 日 实验目的和要求（必填） 实验内容和原理（必填） 主要仪器设备 操作方法与实验步骤 实验数据记录和处理 实验结果与分析（必填） 讨论、心得 实验一革兰氏染色、细菌接种 实验内容 一，革兰氏染色（操作） 二，细菌接种 平板划线法（操作） 斜面培养基接种法（操作） 半固体培养基接种法/穿刺接种法（操作） 液体培养基接种法（操作） 细菌在液体、固体、半固体培养基中的生长现象（示教） 显微镜的使用和保护 --- 原理 油镜与其他物镜的不同是载玻片与物镜之间不是隔一层空气，而是隔一层油质称为油浸系。这种油常选用香柏油 如果玻片与物镜之间的介质为空气，称为干燥系，当光线通过载玻片后，受折射发生散射现象，进入物镜的光线显然减少，这就降低了视野的照明度 香柏油的折射率n＝1.515，与玻璃n＝1.52相近。当光线通过载玻片后，可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射 油浸没物镜 介质：空气；香柏油 油镜的识别 油镜的镜筒最长，透镜直径最小，上面刻有90倍或100倍或Oil等 油镜的使用 先按低倍镜到高倍镜的操作步骤找到物像，并将观察部分移至视野的中央。 转动旋转盘，使高倍镜移向一侧，在盖玻片上滴一滴香柏油，然后将油镜对准通光孔，使油镜下端与香柏油接触(注意操作动作要慢，以免压碎玻片或损坏镜头)。 从目镜内观察，微微上下转动细调节器，至视野内出现清晰的物像时为止。 油镜使用完毕后，必须用拭镜纸沾少许二甲苯将油镜上的香柏油擦净，并用干的拭镜纸檫去二甲苯。 显微镜用毕后，升高镜简，取下玻片标本，转动旋转盘，使每个物镜都不对准通光孔，再下降镜筒，使物镜接近载物台，将聚光镜降下，最后放回橱内。 革兰染色法 由丹麦C.Gram于1884年创立，是细菌学中很重要的鉴别染色法，通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰阳性菌（G+）和革兰阴性菌（G-）两大类 细菌细胞壁的结构 革兰染色法－－原理 G＋菌胞壁结构致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易透入。同时乙醇使细胞壁脱水形成一道屏障，阻止结晶紫—碘复合物从胞内渗出，故细菌仍保留初染