病毒检验技术总结.ppt

能使红细胞完全凝集的病毒的最高稀释倍数为该病毒的血凝效价，此效价为1个血凝单位（HAU） 第二节 病毒的分离与鉴定 病毒颗粒 红细胞 病毒抗体 血凝抑制试验 病毒液中若先加入病毒的特异性抗体，抗体与病毒表面的抗原特异性结合，从而抑制病毒与红细胞的血凝现象，称为血凝抑制试验。 第二节 病毒的分离与鉴定 2．中和试验（Nt） 在体外孵育病毒与特异性抗体的混合物，使病毒与抗体相互反应，再将混合物接种到敏感的宿主体内，经培养后观察CPE或红细胞吸附现象是否消失，即特异性抗体是否中和相应病毒，从而测定残存的病毒感染力的一种方法 3．空斑形成试验 第二节 病毒的分离与鉴定 是一种检查和准确测定病毒滴度的方法。 将稀释的病毒悬液加入单层细胞培养瓶中。病毒吸附后，再覆盖一层融化的半固体营养琼脂，使病毒在单层细胞培养中有限扩散。 结果是每一个有感染性的病毒在单层细胞中可产生一个局限性的感染灶。用活性染料 (如中性红) 染色，则活细胞着色，受病毒感染而破坏的细胞不着色，形成肉眼可见的空斑/蚀斑(plaque)。 每个蚀斑是由一个感染性病毒颗粒形成的，称作空斑形成单位 (plaque forming unit, PFU)。 病毒悬液中的感染性病毒量的滴度可用PFU／ml表示。 4．半数感染量（ID50）和组织培养半数感染量（TCID50） 测定病毒感染鸡胚、动物或细胞后，引起50%死亡或病变的最小量。用来估计病毒感染的强弱程度，但不能准确测定感染性病毒颗粒的多少 第二节 病毒的分离与鉴定 第三节 病毒学检测及诊断 一、形态学检查及诊断 1. 光学显微镜检查： *直接观察到较大的病毒体（如痘病毒） *包涵体 狂犬病毒感染------嗜酸性包涵体 巨细胞病毒感染---“猫头鹰眼”状的嗜酸性包涵体 2. 电子显微镜检查： *透射电子显微镜 用于观察病毒的大小、形态与结构及细胞内的超微结构等 *扫描电子显微镜： 用于观察病毒和细菌表面结构和附属结构等 一、形态学检查及诊断 扫描电子显微镜 第三节 病毒学检测及诊断 H1N1流感病毒电子显微镜图片 狂犬病病毒电子显微镜图片 第三节 病毒学检测及诊断 （1）标本制备 ①超滤法 ②超速离心法 ③接种细胞快速增殖法 ④免疫凝集法 （2）常用观察方法 ①负染色法 ②超薄切片法 ③免疫电镜法 病毒颗粒具有亮度，在周围较暗的背景上显示亮点 过程与病理切片过程相似 免疫组织化学与电镜技术的结合 透射电子显微镜 第三节 病毒学检测及诊断 二、血清学检测及诊断 原理：用已知的病毒抗原检测患者血清中的抗体水平或 用已知的病毒抗体直接检测标本中的病毒抗原 1.病毒抗原的检测：用荧光素、酶或胶体金等标记物标记病毒抗体检测标本中的相应病毒抗原。如ELISA检测HBsAg 第三节 病毒学检测及诊断 2.病毒抗体的检测：已知病毒抗原多数为通过基因工程技术制备的重组抗原，其次是从患者标本中分离纯化的抗原。检测抗体的类型确定患者所处感染阶段 -----急性期单份血清的IgM测定是诊断原发感染和早期感染 -----IgG含量的测定应取病人急性期和恢复期双份血清，若含量升高4倍以上表明感染病毒 第三节 病毒学检测及诊断 三、分子生物学检测及诊断 1.核酸分子杂交技术 2.聚合酶链反应（PCR）-----多种病毒的快速诊断 3.基因芯片技术----如检测H1N1甲型流感病毒 4.基因测序----如病毒耐药基因型的检测 第三节 病毒学检测及诊断 《微生物学检验》 国家卫生和计划生育委员会规划教材 《微生物学检验》 国家卫生和计划生育委员会规划教材 《微生物学检验》 国家卫生和计划生育委员会规划教材 国家卫生和计划生育委员会规划教材 第十七章病毒检验技术 本 章 内 容 第一节 标本的采集、处理与运送 1 第二节 病毒的分离与鉴定 2 第三节 病毒学检测及诊断 3 学习目标及重点 学习目标： 掌握病毒标本采集和送检应遵循的原则；病毒检验鉴定常用技术 熟悉病毒血清学诊断常用的方法 了解病毒感染的实验室快速诊断 学会病毒的培养基本操作 本章重点： ★病毒标本采集和运送原则。 ★病毒学诊断及鉴定常用方法。 ★病毒培养的基本操作。 病毒学检验技术是用实验室检验方法对临床和流行病学现场送检的标本（如人或宿主的血液、组织、尿、粪便和组织液等）进行病毒学的定性和定量分析，为病毒感染和病毒性疾病的诊断、治疗和预防提供科学依据。 检验程序包括标本的采集、分离培养鉴定、快速诊断。 第一节 标本的采集、