单个大鼠肝细胞的微流控芯片化学发光分析.pdfVIP

第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 O-EOll 单个大鼠肝细胞的微流控芯片化学发光分析· 黄勇石明赵书林¨ (广西师范火学化学化工学院，桂林541004) 关键词：单细胞分析；微流控芯片电泳；化学发光检测；大鼠肝细胞 由于细胞内化学组分及生物活性的高度非均匀性，单细胞分析特别是对细胞内组分的定性定量 分析，对于分子生物学，生物过程的物理化学模型及疾病的早期诊断与治疗等具有重要意义，是分 析化学领域的热点研究课题之一。由于细胞的直径一般为微米级，体积极小，细胞内组分含量非常 低(fm01．-zm01)且极为复杂，因此检测细胞内的超痕量组分，具有较大的难度[1】。 微流控芯片电泳是继毛细管电泳后快速发展的微分离分析技术，是芯片实验室在分析化学中最 成功的应用[2】。微流控芯片电泳具有集成化、微型化、分析速度快和消耗试剂量少等特点及微通道 尺寸与单个细胞体积相匹配的优势，特别适合于单细胞分析【3】。近年来，微流控芯片电泳已经应用 于细胞研究中，对于细胞内组分的定量分析已有报道[4．7】。在这些研究中基本是采用激光诱导荧光 (LIF)检测。虽然LIF检测能获得很高的灵敏皮，但LIF需要昂贵的激光器和复杂的光学系统，体 积较大，有悖于微流控芯片的微型化、集成化、经济化发展趋势，而且在LIF检测时，由于细胞内 许多物质没有荧光特性，因而细胞内的物质要用荧光试剂衍生后才能定量测定。衍生反应的不完全和 不均一性有可能导致检测结果偏离细胞中组分的真实含量。 化学发光是一种高灵敏的检测技术，不需要光源，避免了背景光及瑞利散射等杂散光的干扰，具有仪器 结构简单、操作方便、灵敏度高、线性范围宽、分析速度快等优点。微流控芯片电泳与化学发光检 测技术联用能减小仪器的体积，降低仪器的成本，有利于实现微型化和经济化，因而成为微流控芯 片最具有吸引力的检测技术之一。尽管化学发光检测技术具有较大优势，但在微流控芯片电泳单细 胞分析中却应用较少。 微流控装置结合化学发光检测技术，建立了单个大鼠肝细胞中抗坏血酸和氨基酸的同时测定方法。 在该方法中，单细胞的进样、定位、溶膜以及电泳分离和化学发光检测，均在带有V型氧化荆引入 通道的十字型玻璃／PDMS复合芯片上完成。单个细胞直接利用电场力引入。贴壁后在碱性电泳缓冲 s)。胞内抗坏血酸和氨基酸在电渗流的作用下 液的作用下，结合直流电压，细胞实现快速溶膜(~3 迁移至柱后化学发光检测池与发光试剂混合并进行化学发光检测。在优化的实验条件下，抗坏血酸 s内实现同 (AA)、和三种重要的氨基酸，即：丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)和色氨酸(Trp)在140 fmol、0．69fmol、0．54 fmol和0．58 and3。84fmol。 单个大鼠肝细胞中的平均含量分别为38．3，5。15，3．78 ’国家自然科学基金资助项目 ”通讯作者，赵书林，zhaoshulin001@163．corn 第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 ∞4080 ∞ 100 120 1∞ 160 rlm●加 ∞ 40 ∞80100 1∞ M0 160 Time／a 两个大鼠肝细胞的电泳分离图．Peaks：1．Ala；2．Gly；3．Trp；4．AA；U．unknownpeak． 参考文献 【l】1 K．Cottingham,Anal．Chem．2004，76，235a． and 【2】D．Janasek,J．FranzkeA．Manz,Nature，2006，442，374． and K．F．