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p―ERK在COPD大鼠肺气肿形成中的表达研究 　　摘要：目的 探讨在COPD大鼠肺气肿形成过程中肺组织磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）的表达变化。方法 30只大鼠随机分为对照组、21d组、28d组，每只各10只。采用香烟烟熏联合气管内注入脂多糖的方法建立COPD模型。分别于21d、28d用图像分析系统测定肺泡平均内衬间隔（MLI）、平均肺泡数（MAN），用免疫组化法测定肺组织中p-ERK的表达。结果 MLI、MAN、肺组织p-ERK表达在21d组（70.38±7.14×10-6m，125.64±5.41个/m2，0.245±0.020）、28d组（96.76±9.07×10-6m，91.02±9.22个/m2，0.341±0.038）分别与对照组（47.76±4.27×10-6m，154.61±6.40个/m2，0.120±0.021）相比有显著性差异（P0.01）；21d组、28d组MLI与肺组织p-ERK呈正相关（分别r=0.770，P0.01）；21d组、28d组MAN与肺组织p-ERK呈负相关（分别r=-0.753，P0.01）。结论 p-ERK在肺组织表达的增高，可能是COPD肺气肿形成的重要因素之一。 　　关键词：磷酸化的细胞外信号调节激酶；肺疾病；阻塞性；肺气肿 　　肺气肿是慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）重要的病理特征之一，其发病机制不完全明确，与炎症反应、蛋白酶-抗蛋白酶失衡等密切相关[1]。细胞外信号调节激酶（ertracellular-signal regulated kinase，ERK）属于丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）家族，是体内多条信号转导途径的汇集点[2]，可以介导氧化应激的发生，炎症细胞、炎性介质的产生以及蛋白酶的增加等。p-ERK作为ERK的活化形式，目前还未见与COPD肺气肿关系的相关报道。因此，观察在COPD大鼠肺气肿形成过程中肺组织p-ERK的表达，可能为防治COPD肺气肿形成提供新的研究思路。 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 脂多糖（LPS）（菌属O55：B5），北京博奥森生物技术有限公司；天下秀牌香烟（焦油量：11mg，烟气烟碱量：1.0mg），川渝中烟工业有限责任公司；Rabbit Anti-phospho-ERK1/2（Thr202+Tyr204）antibody（bs-3016R），北京博奥森生物技术有限公司；雄性SD大鼠30只，体重（210±20）g，西南医科大学实验动物中心提供；有机玻璃烟熏箱，自制；真彩色医学图像分析系统BI-2000，成都泰盟电子有限公司。 　　1.2方法 选取30只雄性SD大鼠随机分为三组，对照组：10只，呼吸正常空气及饲养4w，于第1、15d气管内注入生理盐水200μl。28d组参照顾延会[3]的造模方法，在第1、15d经气管注入200μl LPS（200μg/200μl），其余时间将大鼠放入机玻璃烟熏箱内烟熏天下秀牌香烟，2次/d，30 min/次，香烟12支/次，烟熏至少间隔2 h/次。21d组制备方法同28d组。 　　1.3肺组织标本处理 分别处死各组大鼠，取左肺下叶，用4%多聚甲醛溶液固定，常规脱水，石蜡包埋，切片，分别行HE染色、免疫组化染色。在显微镜200倍下观察HE染色的肺组织切片，随机选取左、中、右、上、下五个视野进行测量。标记通过各个视野中央十字交叉线的肺泡间隔数（Ns），测出十字交叉线的总长度（L），采用L/Ns表示各个视野肺泡平均内衬间隔（MLI），反映肺泡的直径大小。标记出每个视野内的肺泡数（Na），测出各个视野的面积（S），采用Na/S表示各个视野的平均肺泡数（MAN），反映肺泡的密度改变。检测免疫组化染色切片的随机3个视野肺组织p-ERK相对阳性表达强度，计算p-ERK平均吸光度值（A值）。 　　1.4统计学处理 采用SPSS 17.0统计学分析，数据用均数±标准差（x±s）表示，多组均数采用单因素方差检验。Pearson直线相关分析数据相关性，P0.05为差异具有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 HE染色结果 由图1～3可见，对照组（图1）肺泡结构正常。21d组（图2）肺泡腔大小不一，少许肺泡壁断裂，周围可见部分炎细胞浸润。28d组（图3）肺泡壁断裂、肺泡融合、肺泡腔不规则的扩大，周围可见大量炎性细胞浸润。由表1可见，28d组与对照组比较，MLI明显升高，MAN明显降低（均P0.01）；21d组与28d组比较，MLI明显降低，MAN明显升高（均P0.01）。 　　图1～3大鼠肺泡病理学改变（HE×200）：对照组（图1）、21d组（