显微镜基础绪论.ppt

显微镜基础知识的扩展 1、显微镜的主要指标 显微镜的主要指标包括分辨能力，总放大倍率、景深、视场宽度、镜像亮度、工作距离等。 2、显微镜的的组成，及主要部件 显微镜由光学和机械系统组成 光学系统主要光源、孔径光阑、视场光阑、聚光镜、物镜、目镜等 机械系统包括调焦机构，载物台 显微镜包含两组不同光学系统 1 = 灯丝 2 = 孔径光阑 3 = 物镜光瞳 4 = 观察者的瞳孔 A = 视场光阑 B = (物平面)样品平面 C = 目镜中的中间像平面 D = 观察者眼睛的视网膜 显微镜包含两组不同光学系统 1 = 灯丝 2 = 孔径光阑 3 = 物镜光瞳 4 = 观察者的瞳孔 A = 视场光阑 B = (物平面)样品平面 C = 目镜中的中间像平面 D = 观察者眼睛的视网膜 显微镜的分辨率 分辨率：又称鉴别率、解象力、和分辨本领。能够分辨两个点之间的最小距离。它与δ相反，δ与入射光的波长成正比，与数值孔径N.A.成反比。 关于分辨率 分辨率的重要性 实际观测时分辨率的调整 ①调整聚光镜的孔径光阑，使其数值孔径与物镜的数值孔径一致 ②减小照明光线的波长 ③调整孔径光阑大小，使其数值孔径与物镜对应 蔡司物镜的分辨率---------0.2um(明场) 光学显微镜的景深 h = n X (0.15 ~ 0.30) mm (N.A.) ·M n: 目的物所在介质的折射率 (N.A.): 物镜的数值孔径 M: 显微镜的放大倍数 景深：即焦点的深度，能够同时看清楚物体上下两个平面的深度。 关于景深 景深的意义 是否物镜决定了观察的景深 可使用调整孔径光阑大小和改变照明方式适当的调整景深。 关于自动孔径光阑 关于体式镜的景深（D） 总放大倍率 总放大倍数：物体经过物镜、中间变倍器和目镜放大后，人眼所看到的最终图像的大小与原物体大小的比值。 Moc=250/F2 Mob=Δ/F1 总放大倍率 放大的实际意义 总倍率=物镜倍率(Mob)*目镜倍率(Moc)*中间镜倍率 实际放大倍率 有效总倍率在500N.A和1000N.A之间 镜像亮度 镜像亮度：显微镜下图像的亮度。 镜像亮度的意义 镜像亮度和数值孔径及总放大倍数关系 它与物镜数值孔径值的平方成正比，与放大倍数的平方成反比。 工作距离 工作距离：也叫物距，是指物镜前透镜的表面到被检物体之间的距离。 工作距离的意义 如何选择合适的工作距离 一般被检物体的工作距离在物镜1倍—2倍焦距之间。 显微镜各指标之间关系 清晰度的概念：指图像的锐利程度。 清晰度的影响因素。 它是镜像亮度、分辨率、景深、对比度的综合作用。 显微镜的光源 卤素灯、汞灯、氙灯、LED、激光等的特点及在显微镜中的应用。 卤素灯：热激发发光，连续谱，波段为可见光+紫外+红外，波峰高比LED灯亮、经济，综合效果好，但寿命短2000h。 汞灯：原子激发发光，线光谱，波长短，波段350nm、420nm、455nm，热量和温度高，选取滤色片是关键，寿命为200h。 氙灯：白光单色性，比卤素灯的色温、强度和亮度高，通过光导管传输，寿命2000h，比汞灯贵。 蔡司照明系统的优势 灯泡功率大，透镜的透过率高，光线均匀，利用率高。 显微镜的光源 LED：白光，寿命10000h，不能于研究级显微镜。 激光：单色性，亮度高，会聚性好，偏振性好，但是价格昂贵。 关于蔡司的35瓦灯泡 由于光线利用率高，35低功率的灯泡足以在金相显微镜上使用。 显微镜的孔径光阑 孔径光阑的作用 控制显微镜中的进光亮，调整分辨率和景深。 孔径光阑的调节，及主要事项 应该与物镜的数值孔径相对应。 孔径光阑的特别应用 适当改变照明的方式 显微镜的孔径光阑 什么是科勒照明 有两套成像光路， ①灯丝，孔径光阑，物镜光瞳，观察者的瞳孔 ②视场光阑，(物平面)样品平面，目镜中的中间像平面，观察者眼睛的视网膜 显微镜的视场光阑 视场光阑的作用 调节视域的范围和矫正光路 视场光阑的调节 视场光阑在反射率测量中的注意事项 显微镜的物镜 物镜的主要分类 ①消色差②复消色差③半复消色差 关于萤石物镜的问题 关于镀膜问题，镀膜层数及位置，其他厂家关于镀膜的谎言 关于透过率问题，透过率与实际成像质量的关系 HD、POL、PH、DIC物镜的区别 HD为明暗场物镜， POL消应力偏光物镜， PH相衬物镜， DIC 显微镜的物镜 蔡司物镜的分类，透反物镜的区别 透反物镜透射反射都可以观察，反射物镜透反也可以观察，透射只能观察透射 蔡司物镜的一些优势 Neofluor物镜引进短波长，分辨率提高，可观察紫外波段，比萤石物镜平场度高 显微镜的目镜 为什么目镜不能提高分辨率 只放大物镜在目镜中间焦面上所成的像，不与物体直接成像。 蔡司的目镜标识