二氢吡啶类钙拮抗剂的说课.ppt

* * 二氢吡啶类钙拮抗剂的分析 药学院药物分析教研室 【大纲要求】 1、掌握二氢吡啶类钙拮抗剂类代表药物的体内过程 2、熟悉二氢吡啶类钙拮抗剂类代表药物的体内分析方法 硝苯地平 尼群地平 尼莫地平 氨氯地平 主要代表性药物 主要的理化性质 较强的紫外吸收特性，没有荧光特性 一般显中性，含有N原子的显弱碱性 不稳定性，见光易分解 光学特性 体内过程 口腹易吸收、半衰期短、达峰时间较快 血浆蛋白结合率高 一般经肝脏代谢，代谢产物一般没有活性 含量分析方法 同位素标记法 荧光分析法 气相色谱法 液相色谱法 色谱和质谱联用法 样品的制备：往往采用简单的液液萃取法进行，萃取溶剂多为苯、乙酸乙酯和氯仿等，取萃取后的有机层，挥干用流动相溶解后直接进样分析。 荧光测定法 硝苯地平＋三氯化钛＋邻苯二甲醛＝荧光物质 用乙酸乙酯进行液液萃取（pH=7)，测定硝苯地平 用氯仿进行液液萃取（pH=2)，测定硝苯地平的代谢产物 气相色谱分析 色谱柱：填充柱或毛细管柱 OV-1 OV-17 柱温：225℃～270℃ 检测器：电子捕获检测器 ECD 人血浆中尼群地平的GC法测定 色谱条件：DB-1毛细管柱（25 m× 0.328 mm, I.D., 0.5 μ m) 载气：高纯氮气 检测器: ECD 进样温度：260 ℃ 检测温度：300 ℃ 升温方式：程序升温 255 ℃（6.2 min)－270 ℃（5min） 分流进样：40：1 4℃/min 样品的前处理：取内标，加血样，混合后加入1mol/mL的NaOH0.5ml，混合，加入乙醚-环己烷（1：1），窝旋，离心，取有机相用氮气流吹干，残渣用甲醇溶解后进样分析。 人血浆中尼莫地平的毛细管气相色谱ECD检测及药代动力学 样品制备：加入1μg/ml的尼群地平，再加入1mol/lNaOH 0.5ml，混匀后，用乙酸乙酯－正己烷（1：1）萃取，4000 rpm离心，取有机相吹干后用甲醇溶解后进样分析。 色谱条件：OV-101毛细管柱（25 m× 0.2 mm, I.D., 0.5 μm) 载气：高纯氮气 检测器: ECD 进样温度：260℃ 气化室温度：270℃ 检测温度：300℃ 升温方式：恒温洗脱 分流进样：33：1 2.0 25.0 100.0 回收率 日间 日内 82.3％ 88.4％ 89.2 8.5％ 7.0％ 1.1％ 8.8％ 7.5％ 2.9％ 高效液相色谱法 一般进行的是反相液相色谱法 一般使用紫外检测器或电化学检测器 一般多选用含有缓冲液的甲醇或乙腈为流动相 可选用同类药物或安定类药物为内标 RP-HPLC法测定血浆中的硝苯地平 样品制备 取待测血浆600μl，置于10ml具塞离心管中，加地西泮内标物溶液（300ng/ml）200ul,氨水120μl,涡旋振荡1min,再加入提取溶剂[无水乙醚－正己烷（3：1）] 4ml，涡旋振荡20min，离心（3000r/min）10min，置-20oC的冰箱中冷冻2h，上层有机相转移至另一离心管中，于50oC水浴中用氮气吹干，残渣加50％乙腈200μl, 涡旋混合、离心（1500r/min）10min，取15μl进样（低浓度则进样30μl）。 色谱条件 色谱柱为Luna C18(250*4.6mm,5um)；保护柱为Alltech C18(30*2mm,40um)。流动相为乙腈－水－二乙胺－磷酸（51：49：0.12：0.10，V/V），流速1.2ml/min。柱温45oC。紫外监测器，波长238nm，进样量15～30μl。 RP-HPLC法测定尼群地平 样品制备 避光操作。取体液1μl或组织匀浆4ml，置15ml具塞离心管中，精密加入地尔硫卓内标物溶液（1g/L甲醇）10.2ml，加50mmol/L磷酸盐缓冲溶液（pH9.8）1ml,摇匀，加环己烷－异丙醇（96.5：3.5，V/V）5ml提取，离心（4000r/min）15min,取有机相于水浴中用氮气吹干，残渣溶于100μl流动相，吸取10μl进样分析。 色谱条件 色谱柱为YWG C18(150*4.6mm,5μm)。流动相为甲醇：50 mmol/L磷酸盐缓冲溶液70：30，V/V），磷酸调pH至6.8；流速1.0ml/min。柱温：室温。紫外监测器，波长236nm；进样量10μl。 *