选修一2.2土壤中尿素的细菌的分离和计数概要.pptVIP

（二）样品稀释 （1）测细菌数：一般用104、105、106稀释液 （2）测放线菌：一般用103、104、105稀释液 （3）测真菌数：一般用102、103、104稀释液 原则：确保平板上的菌落数在30～300之间。 　　 ㈣.取样涂布 ◆实验时要对培养皿作好标记。注明培养时间、稀释度、培养物等。 ◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。 ㈤.微生物的培养与观察 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。 之后讲课本P22的最上面内容 讲完第1点后讲课本P22中间楷体字内容引出2、3、4、内容 讲完后讲P23楷体字部分 一、课题背景 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。 2、细菌利用尿素的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 CO(NH2)2 脲酶 + CO2 NH3 +H2O 3、常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。 4、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 一.研究思路 ㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 1、实例： 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。 DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。 ㈠.筛选菌株 2、实验室中微生物的筛选原理： 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4`7H2O 2.1g NaH2PO4 1.4g KH2PO4 3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基： ①从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属于哪类培养基？ 固体培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 选择培养基 培养基的唯一氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 4、培养基选择分解尿素的微生物的原理 选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 back 1、显微镜直接计数： 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里（0.1mm3）样品中微生物的数量。 ㈡.统计菌落数目： 左边和顶边及左边的两个顶点 缺点 不能区分死菌与活菌； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 2.间接计数法（活菌计数法） （1）常用方法： 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。 1个活菌→1个落菌 （2）原理： 稀释涂布平板法。 注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 ㈢.设置对照： 　A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。 一是由于土样不同； 二是由于培养基污染或操作失误。 小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。 方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验 方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。 二.实验的具体操作 ㈠.土壤取样 ◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。 ㈡.制备培养基： 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土 3cm左右，再取样