基于目标替代所构建的电化学竞争开关生物传感器.pdfVIP

第{一届伞国l乜分析化学会议论文集 电化学生物传感器’i生物电化学分析 D90基于目标替代所构建的电化学竞争开关生物传 樊浩1，王安宝2，邢蓉I，王清江i，何品刚木I，方禹之1 (1．华东师范大学化学系上海200062， 2．中国科学院上海硅酸盐研究所上海200050) 凝血酶(thrombin)是一种重要的生理蛋白酶，在血液凝固、炎症和创伤愈合等生 以特异性结合目标分子如蛋白质，氨基酸，有机小分子及一些无机离子的核酸序列片 段。作为核酸序列片段，aptaJIler也能够与其互补的核酸序列杂交形成双链结合，但 是由于凝血酶与aptamer的结合力强于其与互补核酸的结合力，所以凝血酶能替代下 已经杂交后的aptamer，并与之结合。同样，拥有更多互补碱基对的DNA序列，能够替 代下较少互补碱基对的DNA序列。基于以上两种替代机理，我们构建了一种生物传感 器对凝血酶和DNA进行检测。在目标发生替代作用后，引起固定在金电极表面上的修 饰了二茂铁的DNA发生构象变化，从而得到增加的二茂铁的氧化电流，通过电信号的 变化对目标进行检测。 1．实验部分 1．1试剂和仪器 实验中用到的不同序列的寡聚核苷酸均购于上海生工生物技术有限公司。 TGGTGTGGTTGG Aptamer(Apt)：5-GGT Target 凝血酶和牛血清白蛋白，溶菌酶均购于北京鼎国生物技术有限公司。其他化学试剂均 为分析纯。电化学工作站CHl660(上海辰华有限公司)。三电极体系：工作电极为2．0mm 的金电极，参比电极为Ag／AgCl电极(饱和KCI)，对电极为铂丝电极。 1．2传感器的构建 时，HDNA是发卡打开的状态，标记在HDNA上的二茂铁远离电极表面，在目标蛋白凝血 铁接近电极表面，导致二茂铁的电化学信号增加。如果使用此传感器对目标EDNA进行 HDNA恢复发卡结构，同时标记在HDNA上二茂铁接近电极表面造成电化学信号的增加。 442 第十届全国电分析化学会议论文集 电化学生物传感器与生物电化学分析 t ． A 藿 ， 匹==j—J撬一 蔓二墅 知 E=卫一亡=]帆鹏l^ ●棚蚺lHD触 图1实验步骤示意图 2．结果与讨论 2．1发卡DNA的选择 为了提高此传感器灵敏度，我们通过酰胺反应将二茂铁标记至IJHDNA，YDNA和LDNA，再分 别固定在金电极表面，然后在磷酸缓冲溶液进行差分脉冲扫描(范围一O．2V一0．6V)， 所得电流记为厶。接下来分别与10一7mol／L的aptamer进行杂交，得到电流乃，之后利 用沸水解离与它们杂交的aptamer，差分脉冲扫描得到的电流记为易．利用公式 q=毒} JOq (rl代表发卡回环效率)计算了它们的rl，发现拥有标记了二茂铁并且 拥有更多碱基互补的发卡DNA在替代后，得到的信号增加越多。 2．2对凝血酶检测的特异性 如图2所示，此传感器对0—4．6×10—6mol／L的凝血酶有良好的响应，能够特异性检测 4．6×10一lOmol／L的凝血酶，非特异性识别的蛋白质如牛血清白蛋白，溶菌酶对本传 感器几乎没有干扰。 3．结论 构建了一种基于目标替代引起构象变化的电化学生物传感器。 参考文献： 【l】J．A。Hansen，R．Mukhopadhyay,J，Hansen,K．V Y 896． f21 Xiao，X．G．Qu，K．W：Plaxco，A．J，Heeger，J．Am．Chem．Soc．2007，129，11 【31C．E．Immoos，S．J．Lee，M．W．Grinstaff,ChemBioChem．2004，5，1100． biosensorsbasedon electrochemical Competitor．switching