疟原虫镜检技术120228概要.ppt

血片的制作与染色 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 原虫密度计数用途 确定患者原虫感染程度 抗疟药的疗效 疟疾科研研究 疟原虫密度计算 疟原虫密度计算 计算疟原虫密度的三种方法： ● 白细胞原虫密度计数法 (厚血膜 WHO) ● 半定量计数法 (厚血膜) ● 红细胞感染密度计算法(薄血膜) 白细胞原虫密度计数法 镜检厚血膜，按视野顺序，记录200个白细胞中的疟原虫数，如果原虫密度较低，可增加白细胞，计数500-1000 个。 密度单位:原虫数/μl 计算公式：疟原虫数 ÷ 计数的白细胞数 × 患者每微升血白细胞数 = 疟原虫数/μl血。 如果不知患者的白细胞数，则每微升血以8000个白细胞计数(国际标准) 。 疟原虫密度计算 厚血膜的疟原虫计数 从血膜的左上角开始，横向。 计数1个视野后，每次间隔5个视野,再计数。 厚血膜 疟原虫密度计算 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 恶性疟原虫 厚血膜 Rings Gametocytes PM 三日疟原虫 厚血膜 配子体 滋养体 裂殖体 血片中可见 恶性疟 环状体 滋养体 裂殖体 配子体 间日疟 三日疟 卵形疟 由于在血膜制备过程中红细胞溶解，因而其原形态消失，且染液和玻片上可能存在杂质等，要根据疟原虫的三个基本要素仔细加以鉴别。 （1)疑似疟色素 厚血膜在制作和染色过程中，血膜上的染料残渣及空气中或耳垂上的尘埃，有时可误认为疟色素。 疟原虫与其他异物的鉴别 （2）疑似疟原虫核 细菌尤其是球菌或白细胞碎裂后散出的颗粒，常染成红色小点，常与疟原虫的核相似。 （3）疑似疟原虫胞浆 网织红细胞的残骸和白细胞的残骸，常被染成蓝色，颇似疟原虫的胞浆，有时因与上述红点巧合一起，而容易误认为疟原虫的大滋体，可依据疟色素的特点加以区别 疟原虫与其他异物的鉴别 薄血膜中常见的血液成分 血小板 中性粒细胞 单核细胞 淋巴细胞 嗜酸性粒细胞 （4）血液成份与分析 （5）杂质---类似疟原虫的物质 疟原虫与其他异物的鉴别 （6） 形态失常 疟原虫成份丢失。 成份增加。如在多虫感染、多核以及多虫重叠时疟原虫形态构造会有异于正常。 形态改变。恶性疟粗大的环状体。 药物影响。 服氯喹后,大滋养体胞浆停滞发育，失去阿米巴样形态，并发生碎解和色泽加深. 服伯喹后,配子体的核和胞浆破碎，疟色素粗大并相对集中等。 血液涂片镜检疟原虫目前仍是确诊疟疾和鉴别虫种的主要方法，玻片清洁与否，血片制作的质量和染色的好坏，直接影响镜检的速度和准确性。 血片制作 所需材料: 载玻片 采血针 75％酒精棉球 玻片盒 载玻片的清洗： 新玻片的清洗方法 用加有洗洁精或洗衣粉的热水洗涤，浸于95% 的乙醇中1小时以上 已用过的玻片：用加有洗衣粉的热水洗涤，浸于95% 的乙醇中1小时以上 载玻片 取血部位: 指尖 耳垂 血片制作 标准的推片姿势 薄血膜的涂制： 取血液1-1.5μl 血滴置于载玻片的中央， 将推片的一端置于血滴之前，当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，两玻片保持20-30°角， 推成舌状薄血膜，长约2-2.5CM。 血片制作 血片制作 厚血膜的涂制： 取血液4-5μl 血滴置于载片的中央偏右1/3， 由里向外划圈涂成直径为0.8-1厘米 厚薄均匀、圆形厚血膜. 血片制作 每张载玻片上分别做1个薄血膜，1个厚血膜。标准血膜的位置如下图所示。 血片制作 厚、薄血膜优缺点 厚血膜 薄血膜 优点 血量多，面积小，原虫检出率高 红细胞完整，原虫形态改变不大，原虫易于辨认 缺点 原虫在干燥过程中皱缩，红细胞消失，原虫变形较大，原虫鉴定困难 血量比厚血膜少许多，面积比厚血膜的大。检查费时，原虫检出率较低 用途 用于疟疾病人检查 原虫虫种、虫期鉴定及初学者教学标本 血片染色 两种染色方法: 吉氏染色法 瑞氏染色法 常用吉氏染色法 血片的染色 待血片完全干燥后才可染色 1．血膜的固定--甲醇 吉氏染液：染色方法 薄血膜经甲醇固定干燥后，将血片平放， 用PH7.0-7.2的磷酸缓冲液或蒸馏水将吉氏原液稀释，原液与缓冲液为1:20。混匀 染色20-30分钟，晾干镜检。 厚血膜溶血染色 放置多时未染色的血片（2天以上，薄片已用甲醇固定），在染色之前，须在厚血膜上用清水进行溶血，待血