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脂联素基因去信号肽区原核表达及酶免检测方法研究
专 业： 微生物学
学 生： 孙强
导 师： 王云龙 教授
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主要内容
研究背景
目的及意义
实验技术路线
方法与结果
创新与结论
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研究背景
脂肪细胞中发现的唯一与肥胖呈负相关性的特异性血浆蛋白。肥胖、冠心病、Ⅱ型糖尿病患者血浆中的脂联素低于正常水平。
编码人脂联素的apMI基因定位于染色体3q27上，长度为16kbp，包含3个外显子和2个内含子 。
人脂联素由244个氨基酸组成 ，由分泌信号序列、特异序列、胶原重复序列、球状序列等4个结构域组成，其中球状区(gADPN)是脂联素生物活性的关键部位。
脂联素(adiponectin)
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目的及意义
可作为冠心病、糖尿病的辅助诊断依据，并对疾病发生进行有效的预警；
可作为评价药物在治疗肥胖、冠心病和糖尿病疾病方面的效果；
进一步研究脂联素作用机制提供方便；
利用基因工程方法制备脂联素定量检测试剂盒中的标准品，提高了稳定性和生物安全性。
本研究建立的血浆脂联素酶免定量检测方法——
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实验技术路线
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方法与结果（一）
人脂联素基因去信号肽区的克隆与鉴定
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方法与结果（一）
总RNA浓度= OD260×稀释倍数× 40μg/ml
OD280=0.254，OD260=0.485
RNA含量=0.485×1×40=19.4μg/mL
纯度=OD260/OD280=0.485/0.254=1.910
人脂肪组织总RNA的提取
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方法与结果（一）
2、PCR扩增目的基因(678bp )
M.DNA Marker DL 2000；
1.PCRproduct ; 2.Negative control
3、重组质粒酶切鉴定
M.DNA marker DL 2 000;
1. BamHⅠ+XhoⅠ digestion products
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重组ΔSADPN蛋白的诱导表达及纯化
方法与结果（二）
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方法与结果（二）
1、重组菌BL21(DE3)/pET41a/ΔSADPN诱导表达(54.5kD )
M..Protein molecule weight Marker ; 1. Normal cell lysates control
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