第五部分微生物的生产及其影响因素教学课件.pptVIP

一、微生物生长的概念 生长是指微生物细胞吸收营养物质，进行新陈代谢，当同化作用大于异化作用时，生命个体的重量和体积不断增大的过程。 繁殖是指生命个体生长到一定阶段，通过特定方式产生新的生命个体，即引起生命个体数量增加的生物学过程。 个体生长是指微生物细胞个体吸收营养物质，进行新陈代谢，原生质与细胞组分的增加为个体生长。 群体生长是指群体中个体数目的增加。可以用重量、体积、密度或浓度来衡量。 个体生长?个体繁殖? 群体生长 群体生长 = 个体生长 + 个体繁殖 二、微生物生长量的测定 （一）稀释平板菌落计数法 是一种最常用的活菌计数法。?是一种最常用的活菌计数法。取一定体积的稀释菌液与合适的固体培养基在其凝固前均匀混合，或涂布于已凝固的固体培养基平板上。在最适条件下培养后，从平板上（内）出现的菌落数乘上菌液的稀释度，即可计算出原菌液的含菌数。在一个9cm直径的培养皿平板上，一般以出现50～500个菌落数为宜数。 ★技术要求：样品充分混匀，操作熟练快速（15~20min完成操作），严格无菌操作； ★注意事项：每一支吸管只能用于一个稀释度，样品混匀处理，倾注平板时的培养基温度； ★适用范围：中温、好氧和兼性厌氧、能在营养琼脂上生长的微生物， ★误差：多次稀释造成的误差是主要来源，其次还有由于样品内菌体分布不均匀、以及不当操作 原理：将1cm2×0.1mm的薄层空间划分为400小格，从中均匀分布地选取80或100小格，计数其中的细胞数目，换算成单位体积中的细胞数。 适用范围：个体较大细胞或颗粒，如血球、酵母菌等。不适用于细菌等个体较小的细胞，因为（1）细菌细胞太小，不易沉降；（2）在油镜下看不清网格线，超出油镜工作距离。 特点：简便、直接、快速、准确，对酵母菌可同时测定出芽率，或在菌悬液中加入少量美蓝可以区分死活细胞。 （三）称干重 将一定量的菌液中的菌体通过离心法或过滤法分离出来，然后烘干(干燥温度可采用105℃、100℃或80℃)、称重。一般干重为湿重的10%～20%，而一个细菌细胞一般重约10-12～10-13g。 这种方法较适合于丝状微生物的生长量的测定，对于细菌来说，一般在实验室或生产实践中较少使用。 （四）比浊法 原理是在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌数越多，光密度越大。因此，借助于分光光度计，在一定波长下测定菌悬液的光密度，就可反应出菌液的浓度。这种方法的特点是快速、简便；但易受干扰。 一、细菌的个体生长和同步生长 由于微生物细胞极其微小，研究其个体生长存在着技术上的困难。 同步生长的概念：一个细胞群体中各个细胞都在同一时间进行分裂的状态，称为同步生长（synchronous growth） ，进行同步分裂的细胞称为同步细胞。 同步细胞群体在任何一时刻都处在细胞周期的同一相，彼此间形态、生化特征都很一致，因而是细胞学、生理学和生物化学等研究的良好材料。 Helmstetter-Cummings技术 二、微生物生长曲线 适应期的特点： 生长繁殖的速度几乎等于零 细胞形态增大，杆菌的长度增加。 细胞内的RNA尤其是rRNA含量增高，原生质呈嗜碱性。 合成代谢活跃，核糖体、酶类和ATP的合成加快，易产生诱导酶 对外界不良环境条件例如NaCl溶液浓度、温度和抗生素等化学药物敏感。 原因：适应新的环境条件，合成新的酶，积累必要的中间产物。 菌种的菌龄：如果以对数期的“种子”接种，则子代培养的适应期就短。 接种量：一般来说，接种量大，适应期就短，反之则长。因此在发酵工业上，为缩短适应期，一般采用1/10的接种量。 培养基成分：接种到营养丰富的天然培养基中的微生物要比接种到营养单调的合成培养基中的适应期短。新接种的培养基与菌种的原培养基越接近，适应期就越短。 发酵工业上需尽量缩短该期，以降低生产成本。 在食品工业上，尽量在此期进行消毒或灭菌 生长繁殖的速度很快，活菌的数目呈对数增长，因而细胞每分裂一次所需的代时(世代时间)或原生质增加1倍所需的时间最短。 细胞进行平衡生长，菌体内各种成分最均匀。 酶系活跃，代谢旺盛。 在此时期内，菌细胞的形态特征均匀一致，最代表种的特征。 此时期内的微生物的生化特性均匀一致，并且典型。 影响指数期微生物增代时间的因素： 菌种：不同菌种的代时差别极大。 营养成分：同一种细菌在营养物丰富的培养基中生长，其代时较短，反之则长。 营养物的浓度：在营养物浓度很低的情况下，营养物的浓度才能影响生长速率，随着营养物浓度的增高，生长速率不受影响，而只影响最终的菌体产量。如果进一步提高营养物浓度，则生长速率和菌体产量均不受影响。 培养温度：温度对微生物的生长速率有极其明显的影响。 发酵工业上尽量延长该期，以达到较