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第5章 黄酮类化合物 波谱学特征 黄酮类化合物的波谱学特征 色谱法对黄酮类化合物的检识 紫外光谱特征 1H-NMR 13C-NMR EI-MS：R-DA开裂，判断A、B环取代基团 一、色谱法在黄酮鉴别中应用 PC TLC 硅胶 聚酰胺 1、PC法 双向色谱 第一相：醇性展开剂 BAW: n-BuOH-HAc-H2O (4:1:5, 上层) TBA: t-BuOH-HAc-H2O (3:1:1) 第二相：水或水性展开剂 2%～6% HAc 3%NaCl HAc-浓HCl-H2O（30：3：10） 检 视：UV / 氨熏色变 / 2%AlCl3 用于分离黄酮类及其苷的混合物 Rf值 醇性展开剂 BAW: 苷元 (0.7) 〉单糖苷 〉双糖苷 (0.7) 水性展开剂 2%-8% HAc、3%NaCl 苷元 (≈ 0) 单糖苷 双糖苷 (0.5) 3%-5%HAc 游离黄酮（醇）、查尔酮：Rf 0.02 游离二氢黄酮（醇）、二氢查尔酮：Rf 0.1-0.3 2、硅胶TLC 黄酮苷元 CHCl3-MeOH（85：15， 70：5） 甲苯-甲酸甲酯-甲酸（5：4：1）——常用 苯-甲醇 （95：5） 苯-甲醇-醋酸（35：5：5） 甲苯-氯仿-丙酮（40：25：35） 丁醇-吡啶-甲酸 （40：10：2） 黄酮衍生物（甲醚化或乙酰化） 苯-丙酮（9：1） 苯-乙酸乙酯（75：25） 3、聚酰胺TLC 乙醇-水 (3:2) 水-乙醇-乙酰丙酮 (4:2:1) 水-乙醇-甲酸-乙酰丙酮（5:1.5:1:0.5） 水饱和的正丁醇-醋酸（100:1，100:2） 丙酮-水（1:1） 丙酮-95%乙醇-水（2:1:2） 95%乙醇-醋酸（100:2） 苯-甲醇-丁酮（60:20:20） 二、黄酮类化合物的紫外光谱 1、在MeOH中的UV特点 黄酮及黄酮醇类 查尔酮及橙酮类 异黄酮、二氢黄酮及二氢黄酮醇类 1) 黄酮及黄酮醇类 共性：带Ⅰ、带Ⅱ均较强 区别：带Ⅰ位置不同 黄酮：304~350 nm 黄酮醇 3-OH游离：352~385 nm 3-OH取代：328~357 nm 2) 查尔酮及橙酮类 共性 带Ⅰ很强，为主峰 带Ⅱ较弱，为次强峰 区别：带Ⅰ峰位不同 查儿酮：340～390nm 橙酮： 370～430nm 3) 异黄酮、二氢黄酮(醇)类 共性 带Ⅱ为主峰 带Ⅰ很弱，为主峰的肩峰 区别：带Ⅱ峰位不同 异黄酮：245~278 nm 二氢黄酮 (醇)：270~295 nm 小结：确定黄酮类化合物的骨架类型 引入-OH对UV的影响 对峰形的影响 7-OH黄酮：类似于二氢黄酮类(峰带II强) 4’-OH黄酮：类似于查耳酮类(峰带I强) 4’, 7-二羟基黄酮：正常 即：7-OH引入使峰带II增强，4’-OH引入使峰带I增强 对波长的影响 A环引入-OH，带II红移，尤以5,7-OH影响大 B环引入-OH，尤其以2’, 4’, 6’-OH，带I红移 C环引入-OH (3-OH)：带I红移30~50 nm，带II影响小 OH→OCH3：相就峰带紫移15~20 nm 2、黄酮类化合物的紫外诊断试剂 CH3ONa 强碱，使所有-OH变为O-，相应峰带红移 NaOAc 弱碱，不能使5-OH离子化 NaOAc /H3BO3 能与邻二酚OH (不包括5,6-二羟基)络合，使相应峰带红移 AlCl3/HCl AlCl3能与邻二酚OH及5-OH与4-CO络合 HCl则能破坏邻二酚OH与Al3+的络合 1) NaOMe 2) NaOAc (未熔融) 3) NaOAc/H3BO4 带Ⅱ ，+5～10nm A环有邻二Ar-OH (不包括5,6-二羟基) 带Ⅰ，+12～30nm B环有邻二Ar-OH 4) AlCl3及AlCl3/HCl AlCl3及AlCl3/HCl紫外图谱的应用 3-OH,5-OH有无的判断 例 三、黄酮类化合物的MS 苷元：EI-MS 苷：ESI-MS，FD-MS，FAB-MS 1、EI-MS (苷元) M-28：－C=O或－CO R-DA开裂:可用于判断A、B环上的取代基 特点 M+较强，常为基峰 Ⅰ、Ⅱ两条主要裂解途径 黄酮类以Ⅰ为主 黄酮醇类以Ⅱ为主 A1、B1、B2的m/z: 推断A环、B环的取代式样 A1+· 、B1+· 、B2+保留了A、B环的结构 A1、B1 互补 即二者质荷比之和等于M+的质荷比 1) 黄酮类的EI-MS 以裂解途径Ⅰ为主 M+常为基峰 主要碎片为A1+· 、B1+· ，中等强度 [M-CO]+、[A1-CO]+也较突出 2) 黄酮醇类的EI-MS 以裂解途径Ⅱ为主 M+常为基峰 主要碎片为B2+ 、[B2-CO]+，尚有[A1+ H]+ 2、黄酮苷的FD